非甾體類抗炎藥與金雀異黃素抗人胃癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文非甾體類抗炎藥與金雀異黃素抗人胃癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究姓名：崔海靖申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：李榮華20050301中 文 摘 要+ 1 / 2 1 N D I C 5 。 時(shí) 對(duì)B G C - 8 2 3 細(xì) 胞的 抑 制 率。 2 . 熒 光染 色觀 察細(xì) 胞凋 亡: 應(yīng) 用 不同 藥 物 濃 度1 N D 5 0 V g / m l , 1 0 0 } t g / m l 分 別 作用B G C

2、 - 8 2 3 細(xì)胞2 4 h 后， 消化 F 細(xì)胞制成 1 x 1 0 6 / m i 單細(xì)胞懸液，經(jīng) 7 0 %乙醇 4 ℃固定 5 分鐘，P B S 洗滌 1 次，先滴加 碘 化丙 咤 ( P r o p i d i u m I o d i d e , P I 濃 度為0 . 0 5 m g / m l ) 熒光 染 色 液混 勻， 2 分 鐘 后再 滴 加丫 淀 橙( A c r i d i n e O r a n g

3、e , A O濃度為 0 . 1 m g / m l ) 熒光染色液， 混勻， 取 1 滴在玻片上于熒光顯微鏡下觀察并照相。鏡下定量計(jì)數(shù) 1 0 個(gè)視野共 3 0 0個(gè)細(xì)胞，按公式: 凋亡細(xì)胞數(shù)/ 總細(xì)胞數(shù)X 1 0 0 %，計(jì)算細(xì)胞2 4 h 凋亡率。同樣，細(xì)胞與以上兩個(gè)濃度的 I N D作用 4 8 h ,i i 一 算細(xì)胞4 8 h 凋 亡率。 細(xì)胞分別與G e n l O g g / m l , 2 0 g g / m

4、 l ,4 0 p g / m l 作用2 4 h 及4 8 h 后， 用上 述方 法分 別 計(jì)算細(xì)胞2 4 h及4 8 h 凋亡率。 細(xì)胞與終 濃 度分別為。 、 I N D的I C 5 0 , G e n的I C 5 0 , 1 / 2 I N D I C 5 0 +1 / 2 G e n I C 5 。 的 藥 物共同 作用4 8 小時(shí) . 后，也按同樣方法計(jì)算細(xì)胞凋亡率。 3 . 瓊脂糖凝膠電泳觀察各組細(xì)胞 D N A斷裂情況

5、: B G C - 8 2 3 細(xì)胞與終濃度分別為 0 , I N D的I C 5 0 , G e n 的I C 5 o , 1 / 2 I N D I C 5 o +I / 2 G e n I C 5 。 的 藥物共[ r l l作用 4 8 小時(shí)后，收集細(xì)胞， P B S 洗滌兩次，每次 1 0 0 0 轉(zhuǎn)離 心5 分 鐘， 棄 上清液后 加入5 M碘 化 鉀5 0 8 1 , 震 蕩3 0 秒釗 ‘ ， 加入2 1 0 8

6、1 0 . 9 % N a C l 溶液和氯 仿: 異戊醇( 2 4 : 1 ) 4 0 O V I反復(fù)顛倒混勻抽提D N A , 置高速離心機(jī) 1 0 0 0 0 轉(zhuǎn)/ 分鐘， 離心5 分 鐘。 緩 慢吸 取上 清 液大 約2 5 0 閃 ， 加 入 異丙 醇1 5 0 川 ，反復(fù)顛倒混勻， 直至出 現(xiàn)肉 眼可見(jiàn)的白 色絮狀沉淀物， 置高速離心機(jī)4 0 0 0 轉(zhuǎn)/ 分鐘， 離心 2 分鐘沉淀D N A ， 棄上清液，于管中 加入