家蠶肽聚糖識(shí)別蛋白基因(BmPGRP-L1)參與Imd信號(hào)通路.pdf

1、肽聚糖識(shí)別蛋白（peptidoglycan recognition proteins，PGRPs）作為一個(gè)主要的模式識(shí)別受體，在家蠶Bombyx mori的天然免疫中具有重要的作用。本研究主要探討家蠶PGRP-L1基因的功能及其所參與的免疫信號(hào)通路。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增獲得家蠶PGRP-L1基因。利用微生物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)對(duì)5齡起蠶分別注射大腸桿菌Escherichia coli、釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae、

2、枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis和PBS，12 h后取體壁和頭部提取RNA，然后采用RT-PCR和凝膠電泳技術(shù)測(cè)定BmPGRP-L1基因的表達(dá)水平；利用RNA干涉實(shí)驗(yàn)向5齡起蠶注射PGRP-L1 dsRNA或PBS，6 h后再分別注射3種滅活的微生物或PBS，然后檢測(cè)家蠶體壁及頭部的免疫相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(Rel，Cactus和Relish)以及家蠶多個(gè)抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)基因(攻擊素

3、、Moricin、葛佬素)的表達(dá)情況。
　　本文從家蠶的組織中克隆了BmPGRP-L1基因，通過(guò)序列分析發(fā)現(xiàn)BmPGRP-L1與果蠅的DmPGRP-LC的相似度較高，而果蠅的DmPGRP-LC在被革蘭氏陰性菌感染后從而激活I(lǐng)md途徑，那么家蠶BmPGRP-L1是否參與Imd信號(hào)通路？
　　微生物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)顯示注射大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)組比注射PBS的對(duì)照組BmPGRP-L1基因轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)，而注射釀酒酵母和枯草芽孢桿菌的實(shí)驗(yàn)組Bm

4、PGRP-L1轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有變化；利用RNAi技術(shù)成功敲低BmPGRP-L1表達(dá)。對(duì)5齡敲低的家蠶注射滅活的微生物，敲低實(shí)驗(yàn)組relish因子表達(dá)低于正常對(duì)照組，相應(yīng)地抗菌肽表達(dá)也有不同程度的下調(diào)。
　　微生物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示BmPGRP-L1基因參與家蠶對(duì)革蘭氏陰性菌大腸桿菌的免疫響應(yīng)；RNAi實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示BmPGRP-L1基因在家蠶的體壁和頭中參與Imd信號(hào)通路。這些結(jié)果說(shuō)明BmPGRP-L1基因在家蠶的先天性免疫中扮演著重要的