中國文昌魚肽聚糖識(shí)別蛋白（PGRP）的初步研究.pdf

1、文昌魚(amphioxus)在進(jìn)化中具有重要的地位，研究其免疫分子的功能可以從中了解免疫的進(jìn)化線索。肽聚糖識(shí)別蛋白(pcptidoglycan recognition proteinPGRP)是一類在天然免疫系統(tǒng)中起著免疫識(shí)別、信號(hào)傳導(dǎo)以及抗菌效應(yīng)的分子。PGRP分別在進(jìn)化上的低等和高等的生物類群中雖然有相似的地方，但也有較大的差異性。在果蠅中，PGRP分子在免疫通路中起著關(guān)鍵的信號(hào)識(shí)別及信號(hào)傳導(dǎo)的作用，并作為清道夫降解體內(nèi)的肽聚糖；在

2、高等的哺乳動(dòng)物中，PGRP起著抗菌的效應(yīng)分子的作用。為了研究PGRP的功能的演化過程，我們從中國文昌魚消化道cDNA文庫中獲得了三個(gè)pgrp基因的部分序列以后，激發(fā)我們?nèi)パ芯克鼈冊(cè)谖牟~這種過渡型生物中所發(fā)揮的功能。 本文采用5'RACE和3'RACE的方法從中國文昌魚cDNA一鏈中克隆得到3個(gè)pgrp的全長序列，分別命名為中國文昌魚pgrp1、pgrp2和pgrp3。經(jīng)過基因的同源比對(duì)，發(fā)現(xiàn)中國文昌魚的三個(gè)PGRP與多種物種都

3、有具有很高的相似性，為研究該基因家族的演化過程提供了重要線索。 在基因組水平上，本文通過基因組PCR的方法成功克隆出3個(gè)pgrp的基因組內(nèi)含子序列和上下游的非翻譯區(qū)序列。為該基因家族的基因組演化和表達(dá)調(diào)控方式提供了參考。通過Southern雜交確定了文昌魚pgrp1的拷貝數(shù)不止一個(gè)，這些拷貝數(shù)的變化可能反映了在文昌魚這一物種中新的基因功能的產(chǎn)生。通過實(shí)時(shí)定量PCR的方法，發(fā)現(xiàn)三個(gè)pgrp基因在革蘭氏陽性和陰性的細(xì)菌感染后都有不同

4、程度的上調(diào)表達(dá)，尤其是在陽性菌的感染后，而且在不同的組織中的分布模式有所差異。提示這三個(gè)分子跟細(xì)菌的急性感染有直接的關(guān)系。為了進(jìn)一步了解文昌魚PGRP1具體的細(xì)胞功能定位，我們構(gòu)建了PGRP1的真核轉(zhuǎn)染載體，并將其轉(zhuǎn)染到了哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行定位，與對(duì)照相比，發(fā)現(xiàn)其定位于細(xì)胞質(zhì)中，并在細(xì)胞的培養(yǎng)上清中出現(xiàn)，提示了該分子在以上的部分起作用。另外，本文通過構(gòu)建體外原核表達(dá)載體，從大腸桿菌BL21中成功表達(dá)出了中國文昌魚PGRP1與TRX的融合