中國青島文昌魚RLHs與VISA的發(fā)現(xiàn)及功能的初步研究.pdf

1、免疫系統(tǒng)的誘導(dǎo)性防御機制是由一系列的模式識別受體對病原體的識別所啟動的。RIG—I樣解旋酶（RIG—I—like helicases，RLHs）是新發(fā)現(xiàn)的最重要的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)模式識別受體，能夠識別細(xì)胞質(zhì)中的病毒RNA，通過RLH級聯(lián)信號誘導(dǎo)干擾素和促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生，對抗病毒天然免疫的建立起著非常重要的作用。由于當(dāng)前對脊椎動物的RLHs及其下游的接頭分子VISA（Virus induced signaling adaptor）的起源和進(jìn)化

2、并不是很清楚，同時對RLH信號通路的研究也僅限于在哺乳動物中的研究，而文昌魚作為無脊椎動物向脊椎動物進(jìn)化過渡階段的代表，成為解釋這個信號通路演化的關(guān)鍵所在。 因此，本文首次在青島文昌魚中克隆了兩個RLH家族成員和一個VISA樣分子，分別命名為：BbtRLH1、2和BbtVISA。系統(tǒng)發(fā)生顯示，BbtRLH1是脊椎動物MDA5和LGP2的祖先基因，而BbtRLH2和BbtVISA則分別是脊椎動物RIG—I和VISA的直系同源基因。

3、通過Real—time PCR及原位雜交的方法發(fā)現(xiàn)，BbtRLHs和BbtVISA在文昌魚成體中的表達(dá)都集中在文昌魚主要的免疫器官—消化道和肝盲囊中表達(dá)。另外，Poly（I：C）和金黃色葡萄球菌的感染能夠有效地刺激BbtRLH2的高表達(dá)，然而對BbtRLH1的表達(dá)量卻幾乎沒有什么影響。 我們進(jìn)一步構(gòu)建BbtRLHs和BbtVISA的真核表達(dá)載體，成功的轉(zhuǎn)染293T和Hela細(xì)胞并且在其中表達(dá)。實驗結(jié)果表明，BbtRLHs和Bbt

4、VISA都是細(xì)胞質(zhì)蛋白。我們同時也發(fā)現(xiàn)，雖然BbtRLHs和BbtVISA在293T細(xì)胞中不能激活I(lǐng)FN—β與NF—?B信號通路，但BbtRLH2可以通過其CARD結(jié)構(gòu)域和BbtVISA相互作用，同時BbtVISA也可以與人的TRAF3相互作用。 綜上所述，我們首次在無脊椎動物中發(fā)現(xiàn)RIG—I的同系物，文昌魚的RLH家族正處于無脊椎動物向脊椎動物進(jìn)化的過渡階段，而其VISA樣分子則是目前為止發(fā)現(xiàn)的脊椎動物VISA最早的祖先。雖然