人白細胞介素-10真核表達載體pcDNA4-HisMaxA-hIL-10的構建及其在兔滑膜細胞中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　目的:本研究擬從人外周血單個核細胞中克隆全長人白細胞介素-10(hIL-10)基因，構建hIL-10高效真核表達載體，通過轉染兔滑膜細胞觀察其表達，探討IL-10基因治療類風濕關節(jié)炎(RA)的可行性?！　》椒?提取人外周血單個核細胞總RNA，并以寡聚核苷酸引物逆轉錄合成eDNA。根據GeneBank中人IL-10mRNA全長開放讀框(NM000572)，設計合成人IL-10完整開放讀框序列的PCR引物，分別引入限制性內切酶酶切位點

2、。RT-PCR擴增目的基因hIL-10，回收純化PCR產物，經限制性內切酶酶切和T4連接酶作用下定向克隆入真核表達載體pcDNA4/HisMaxA，構建重組真核表達載體pcDNA4/HisMaxA—hIL-10，酶切分析和DNA測序驗證，確認hIL-10全長開放讀框正確插入真核表達載體的多克隆位點。以復合陽離子脂質體介導，重組真核表達載體轉染兔滑膜細胞。收集轉染后12h、24h、48h、72h和第7d、14d的細胞培養(yǎng)上清液，應用酶聯(lián)免

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