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1、采食量是影響動(dòng)物生產(chǎn)性能的重要因素之一。目前認(rèn)為,下丘腦食欲中樞的信號(hào)整合在“食欲調(diào)控網(wǎng)絡(luò)”中扮演著重要的作用。下丘腦弓狀核促采食神經(jīng)元能夠感應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如葡萄糖、脂肪酸和氨基酸等濃度的變化,從而刺激AgRP蛋白的表達(dá)和分泌,參與控制采食和能量平衡。迄今為止,不同脂肪酸對(duì)動(dòng)物采食調(diào)控的影響及其機(jī)制還不是很清楚。為此,本研究在細(xì)胞水平上,以小鼠下丘腦N38細(xì)胞為模型,采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)不同脂肪酸作用下AgRP蛋白的表達(dá)及分
2、泌情況,采用定量PCR技術(shù)檢測(cè)AgRP、CD36以及代謝相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平,并采用RNA干擾和受體激動(dòng)劑處理等方法研究和比較不同脂肪酸對(duì)炎癥信號(hào)通路及胰島素、瘦素信號(hào)通路變化的影響。研究結(jié)果如下:
?。?)不同的脂肪酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP的表達(dá)和分泌具有不同的影響。其中,100μM的丁酸及油酸、棕櫚酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP的表達(dá)和分泌無(wú)顯著影響;而100μM月桂酸、辛酸以及硬脂酸、肉豆蔻酸能夠顯著促進(jìn)AgRP蛋白的表達(dá)和分
3、泌;而100μM的亞油酸能夠抑制AgRP蛋白的表達(dá)及分泌。
?。?)10μM和50μM的亞油酸能顯著抑制N38細(xì)胞AgRP蛋白的分泌,當(dāng)濃度增加到100及300μM時(shí),還能夠顯著抑制AgRP蛋白的表達(dá);硬脂酸及月桂酸在10、50及100μM均能顯著促進(jìn)AgRP蛋白的表達(dá)和分泌。
(3)100μM亞油酸與LPS共處理后,顯著逆轉(zhuǎn)了TLR4蛋白及TLR4依賴(lài)的炎癥通路蛋白JNK/IKKα/β的抑制效應(yīng);干擾TLR4后,硬脂
4、酸顯著逆轉(zhuǎn)了蛋白TLR4及TLR4依賴(lài)的JNK蛋白的表達(dá);而月桂酸也能夠逆轉(zhuǎn)TLR4及IKKα/β的促進(jìn)效應(yīng)。表明TLR4通路參與介導(dǎo)了上述脂肪酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)作用。
?。?)100μM亞油酸能顯著增加N38細(xì)胞胰島素及瘦素通路的敏感性,與LPS共處理后,胰島素及瘦素通路的敏感性降低,從而逆轉(zhuǎn)了AgRP的抑制作用;而100μM的硬脂酸能顯著抑制胰島素及瘦素信號(hào)通路,干擾TLR4受體后,顯著逆轉(zhuǎn)了IRS/Ak
5、t/FoxO1及JAK2/STAT3蛋白降低的效應(yīng),從而抑制了AgRP蛋白的促進(jìn)作用;100μM月桂酸對(duì)胰島素及瘦素通路無(wú)顯著影響。
?。?)100μM的亞油酸能夠顯著降低代謝相關(guān)基因CPT1/FAS的表達(dá)量,而顯著增加CD36 mRNA的表達(dá)量;硬脂酸能夠顯著增加CPT1/FAS及CD36的表達(dá)量;100μM的月桂酸對(duì)ACCα/FAS/CPT1/UCP2及CD36的表達(dá)量均無(wú)顯著影響。
綜上所述,不飽和脂肪酸——亞油
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