介導金葡菌侵襲細胞的FnBPA蛋白功能肽段的初步研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌(以下簡稱金葡菌)是革蘭染色陽性病原菌，能引起多種疾病。過去研究認為金葡菌屬于胞外寄生菌。但近來的研究表明，金葡菌可以侵襲多種非專職吞噬細胞，F(xiàn)nBP蛋白是介導金葡菌侵襲宿主細胞的關(guān)鍵表面蛋白。 研究認為FnBP蛋白通過與纖連蛋白結(jié)合從而介導細菌與細胞的結(jié)合，其中FnBPA與纖連蛋白結(jié)合的關(guān)鍵位點位于蛋白D結(jié)構(gòu)域，以重復序列為單位，包括3個連續(xù)的完整的重復序列D<,1>、D<,2>、D<,3>和一個截短的D<,4>

2、序列。由于空間位阻的關(guān)系，如果FnBP僅僅以重復序列為單位結(jié)合Fn分子，勢必造成實際結(jié)合位點的減少和D4截短序列功能的冗余。為保證最大限度的生物利用和結(jié)合，我們推測FnBPA D domain中的Fn結(jié)合位點可能并不是以重復序列為單位的，某些截短的重復序列或具有結(jié)合功能，或和下一個重復序列的一部分組合產(chǎn)生新的結(jié)合位點。本實驗的目的是對以上推測進行初步驗證。 根據(jù)文獻報道，我們建立了細菌侵襲293細胞的實驗模型，并通過此模型找到了

3、金葡菌有效侵襲株04018作為實驗用菌株。利用基因工程的方法，克隆了04018菌株的FnBPA蛋白D<,1>區(qū)C端和D<,2>區(qū)N端肽段的基因片段，在大腸桿菌中表達了GST與該肽(FnBPA-D1c/D2n)的融合蛋白。ELISA實驗證實融合蛋白中的目的肽能夠結(jié)合Fn，細菌侵襲細胞的實驗證實融合蛋白的目的肽能夠抑制金葡菌侵襲293細胞，蛋白的50％抑制劑量約為20μg/ml，相當于2.5μg/ml肽。 通過本課題的研究，我們找到