中藥病毒克顆粒劑的研制及其抗NDV的藥理學研究.pdf

1、本試驗研制中藥病毒克顆粒劑并探討其抗雞新城疫病毒(NDV)活性，為臨床應用提供理論依據(jù)。為此進行一系列試驗并取得如下結(jié)果： 1.病毒克顆粒劑的研制：以黃芩甙含量和浸膏得率為檢測指標，選擇提取時間、提取次數(shù)和醇沉時乙醇濃度3個因素，按L9(34)正交表優(yōu)選最佳提取工藝條件。用薄層色譜法(TCL)對制劑中的黃連、金銀花進行定性鑒別，紫外分光光度法測定黃芩甙含量，建立病毒克顆粒劑的質(zhì)量標準。以黃芩甙含量及顆粒外觀顏色的變化為指標，考察

2、溫度、濕度、光照對該制劑穩(wěn)定性的影響。 病毒克顆粒劑的最佳提取工藝條件為用10倍量的水煎煮2次，每次2h，醇沉時乙醇的濃度為55％。TCL能檢出黃連和金銀花，黃芩甙在1.0～5.0μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系r=0.9992(n=5)，平均回收率為97.73％，RSD為0.76％(n=5)；該法準確、可靠、重現(xiàn)性好，可作為本品的質(zhì)量控制標準。在強光照射條件下黃芩甙含量未發(fā)生明顯變化，但環(huán)境濕度愈高，黃芩甙含量及外觀顏色變化愈明顯；

3、顆粒劑的有效期為3年。 2.病毒克顆粒劑具有良好的抗雞NDV活性：采用細胞學技術(shù)，通過細胞病變抑制法和MTT比色法檢測病毒克顆粒劑在雞胚成纖維細胞(CEF)中對NDV增殖的影響；以病毒唑為對照藥品，通過血凝效價測定評價該制劑在雞胚中對NDV的抑制作用；采用人工感染防治試驗和臨床治療試驗，對其體內(nèi)抗NDV活性和治療效果進行評價。 病毒克顆粒劑對CEF的半數(shù)中毒濃度(TC50)為61.35mg/ml，抗NDV的半數(shù)有效濃度(

4、EC50)為3.2mg/ml，治療指數(shù)(TI)為19.2；對NDV有預防和中和作用，并存在明顯的量效關(guān)系(P＜0.01)，感染后9小時以內(nèi)給藥能有效地抑制NDV的復制。對雞胚的最大無毒劑量大于700mg，預防組、治療組的HA效價均極顯著低于攻毒對照組(P＜0.01)，明顯推遲NDV引起雞胚死亡時間。病毒克顆粒劑高、中劑量組的療效高于散劑組(p＜0.01)，而低劑量組的療效與散劑組相當(P＞0.05)。治療臨床發(fā)生的典型和非典型性雞新城疫

5、有效率高于95％，極顯著高于對照組(P＜0.01)。病毒克顆粒劑對NDV在雞胚成纖維細胞中和雞胚中的增殖具有明顯的抑制作用，對雞新城疫的療效優(yōu)于同劑量散劑。 3.病毒克顆粒劑能顯著增強雞的免疫功能：海蘭褐雛雞隨機分成預防組、治療組和對照組，NDV攻毒前后按設(shè)定程序給于病毒克顆粒劑。分別于攻毒后7、14、21天測定各組ND-HI抗體和免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的總量；17天各組紅細胞IC花環(huán)率、C3b受體花環(huán)率和20天免疫器

6、官指數(shù)(法氏囊、胸腺、脾臟)等指標，觀察病毒克顆粒劑對雛雞免疫功能的影響。 病毒克顆粒劑治療組和預防組ND-HI效價和免疫球蛋白總量均呈上升趨勢，在14、21天時治療組的ND-HI效價顯著高于對照組。在7天時，預防組和治療組的IgA、IgM極顯著高于對照組(P＜0.01)。用藥組C3b受體花環(huán)率、IC花環(huán)率均極顯著高于對照組(P＜0.01)。治療組胸腺指數(shù)顯著高于對照組(P＜0.05)；預防組脾指數(shù)顯著低于對照組(P＜0.05)

7、。病毒克顆粒劑對ND患雞的免疫功能具有顯著的增強作用。 4.病毒克顆粒劑顯著改善新城疫患雞的肝腎功能：海蘭褐蛋雛雞隨機分成陰性對照組、陽性對照組、預防組和治療組，攻毒前后按設(shè)定試驗程序給予病毒克顆粒劑。于攻毒后10天各組雞心臟采血，分離血清測定其生化指標，評價病毒克顆粒劑對新城疫病雛雞肝腎功能的影響。 預防組和治療組血清尿素氮、尿酸、肌酐和乳酸脫氫酶的含量極顯著低于陽性對照組(p＜0.01)；谷革轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量