干預(yù)細(xì)胞因子信號途徑下調(diào)同種免疫反應(yīng).pdf

1、背景:細(xì)胞因子在同種免疫反應(yīng)中對T細(xì)胞的增殖、分化、效應(yīng)起到重要的調(diào)節(jié)作用。其中T細(xì)胞生長因子可增強(qiáng)同種免疫反應(yīng)，而IL-10與TGF-β1可以抑制同種免疫反應(yīng)，它們在排斥發(fā)生和誘導(dǎo)耐受中發(fā)揮著重要的作用。在研究同種免疫反應(yīng)的基礎(chǔ)上，采用阻斷T細(xì)胞生長因子作用通路和提高IL-10、TGF-β1水平來干預(yù)細(xì)胞因子的信號途徑抑制同種免疫反應(yīng)，并分析建立耐受所需要的條件。 方法:1)體外實(shí)驗(yàn)：用絲裂原或同種抗原刺激人PBMC和小鼠脾細(xì)

2、胞，觀察其survivin表達(dá)規(guī)律并檢測臨床急性排斥活檢標(biāo)本survivin的表達(dá)。在MLC中加入抗γ公共鏈抗體封閉T細(xì)胞生長因子受體，檢測培養(yǎng)細(xì)胞的增殖(羧基熒光素乙酰乙酸CFDA-SE染色)、細(xì)胞凋亡(PE-CD3，F(xiàn)ITC-Annexin-v)、細(xì)胞周期(PI檢測)和survivin表達(dá)。2)體內(nèi)抗γ公共鏈抗體實(shí)驗(yàn)：經(jīng)尾靜脈輸注5×107C57BL/6小鼠脾細(xì)胞給F1小鼠(Balb/c×C57BL/6，H-2b/d)建立移植物抗宿

3、主模型(GVHR)，不同時(shí)間點(diǎn)檢測供者淋巴細(xì)胞survivin表達(dá)。在輸注細(xì)胞后1、3、7天給予抗γ公共鏈抗體，一共3次，并觀察其治療效果。3)體內(nèi)IL-10、TGF-β1干預(yù)實(shí)驗(yàn)：小鼠皮膚移植后，將同時(shí)載有IL-10、TGF-β1基因的質(zhì)粒通過高壓快速注射方法輸注，共注射6次。觀察移植皮膚存活時(shí)間、檢測脾臟CD4+CD25+細(xì)胞比例及脾細(xì)胞殺傷能力。 結(jié)果:1)絲裂原和同種抗原刺激CD3+細(xì)胞表達(dá)survivin，培養(yǎng)第3至第

4、4天陽性細(xì)胞數(shù)目達(dá)最高，后逐漸下降。腎臟急性排斥與無排斥(局部淋巴細(xì)胞浸潤)標(biāo)本比較，survivin表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。加入抗γ公共鏈抗體后T細(xì)胞發(fā)生凋亡，M期細(xì)胞數(shù)下降及凋亡細(xì)胞數(shù)增加(P＜0.05)。Survivin表達(dá)被抗γ公共鏈抗體抑制(P=0.043)。2)GVHR小鼠肝臟中央靜脈周圍和匯管區(qū)出現(xiàn)survivin陽性淋巴細(xì)胞浸潤，并維持到第12天。在給予抗體治療后肝臟內(nèi)淋巴細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。抗體治療組ALT、AS

5、T明顯低于GVHR組(P=0.024)。3)高壓快速注射方法可以使外周血中一過性高表達(dá)目的基因產(chǎn)物，IL-10+TGF-β1組與各組比較移植物存活時(shí)間延長(P＜0.05)，脾臟CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞比例升高(P＜0.05)，脾細(xì)胞的殺傷能力下降。結(jié)論T細(xì)胞激活后可表達(dá)survivin，表現(xiàn)強(qiáng)烈的增殖現(xiàn)象。阻斷γ公共鏈或增高體內(nèi)IL-10、TGF-β1水平可顯著降低同種免疫反應(yīng)，但是不能形成耐受。單獨(dú)清除T細(xì)胞克隆和建立模擬耐受的體