骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過RAP1-NF-κB信號通路分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)同種異體排斥反應(yīng).pdf

1、目的:間充質(zhì)干細(xì)胞因其擁有的免疫抑制能力和低抗原表達(dá)的特性使其在移植免疫領(lǐng)域擁有較強的研究和應(yīng)用價值。NF-κB信號通路與間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)特性相關(guān)并且Rap1蛋白是NF-κB信號通路中的重要調(diào)控蛋白，因此Rap1基因敲除會對NF-κB信號通路的活化產(chǎn)生影響。我們通過Rap1基因敲除小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與其同種同系野生型小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞的比較，研究Rap1/NF-κB信號通路在干細(xì)胞移植免疫排斥反應(yīng)中的作用機制。
　　實驗方法

2、與結(jié)果:我們分別從Rap1基因敲除小鼠及其同種同系野生型小鼠骨髓中提取出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并對其進(jìn)行相關(guān)的鑒定分析。利用體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實驗對兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的體外免疫調(diào)節(jié)能力進(jìn)行比較，研究間充質(zhì)干細(xì)胞中Rap1蛋白的表達(dá)對其自身免疫調(diào)節(jié)能力的影響。研究發(fā)現(xiàn)，兩種間充質(zhì)干細(xì)胞對體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)增殖的抑制作用相似(P＞0.05)。但通過應(yīng)用兩種間充質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)上清作用于混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，野生型小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(RWT-MSCs

3、)抑制混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)增殖的能力強于Rap1基因敲除小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞（RKO-MSCs）(P＜0.01)。通過流式的方法比較兩種間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-10、TNF-α、IL-6這4種因子的濃度，我們發(fā)現(xiàn)這四種細(xì)胞因子的濃度在兩種間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)的上清液中都會發(fā)生變化，表現(xiàn)為野生型間充質(zhì)干細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力強于Rap1基因敲除間充質(zhì)干細(xì)胞(P＜0.05)，提示Rap1蛋白的表達(dá)與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的可溶

4、性細(xì)胞因子相關(guān)。我們用小鼠心臟移植動物模型，分析兩種間充質(zhì)干細(xì)胞與雷帕霉素聯(lián)合干預(yù)于小鼠急性心臟移植排斥反應(yīng)的生存期以及移植物標(biāo)本的檢測。實驗分為1X雷帕霉素(1XRapa)，2X雷帕霉素(2XRapa)，1X雷帕霉素聯(lián)合RWT-MSCs，2X雷帕霉素聯(lián)合RWT-MSCs，1X雷帕霉素聯(lián)合RKO-MSCs，2X雷帕霉素聯(lián)合RKO-MSCs六組進(jìn)行。其中2X雷帕霉素與RWT-MSCs聯(lián)合使用組與其他組相比，可以顯著地延長心臟移植物生存期(

5、P＜0.01)，效果最差的組來自野生型干細(xì)胞與1X雷帕霉素的聯(lián)合使用，最短生存期僅有6天左右。效果最好的組是野生型小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞與高劑量雷帕霉素的聯(lián)合使用，最長生存期可以達(dá)到30天，并表現(xiàn)與其他組別相比較少的炎癥細(xì)胞的浸潤以及移植物中Foxp3的表達(dá)增加(P＜0.01)。對小鼠移植排斥時血清蛋白因子濃度進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)2X雷帕霉素聯(lián)合RWT-MSCs組的小鼠血清中IFN-γ、IL-10、TNF-α、IL-6這4種蛋白濃度與其他組相比明顯