肝細(xì)胞肝癌中EMT調(diào)控因子的表達(dá)及其與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　 研究EMT調(diào)控因子在肝細(xì)胞肝癌中(hepatocellular Carcinoma,HCC)的表達(dá)及其與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系,進(jìn)一步探討EMT調(diào)控因子之間的相互關(guān)系及其與預(yù)后的關(guān)系,初步探討肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 收集天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病歷隨訪資料完整的HCC病例97例,應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)Twist1、Twist2、Snail、Slug、E-cadherin、MMP-2、MM

2、P-9在HCC中的表達(dá),采用Mattern積分法分析它們?cè)趶?fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組和無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組兩組間差別、它們之間的相互關(guān)系及它們與生存預(yù)后的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.臨床病例資料回顧
　　 在97例HCC中復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組49例,平均生存時(shí)間為26.423±3.279個(gè)月,中位生存時(shí)間為21個(gè)月；無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組48例,平均生存時(shí)間46.75±3.325個(gè)月,中位生存時(shí)間為56個(gè)月,復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組生存時(shí)間較無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組

3、短(P=0.000)。復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān),臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的病人生存時(shí)間較Ⅰ、Ⅱ期的病人短(x2=41.399,P=0.000)；腫瘤體積越大,越容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移(x2=7.506,P=0.006)；病理分級(jí)越高,病人越容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移(x2=4.118,P=0.042)；復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移和性別、年齡無關(guān)(x2=0.639,P=0.424；x2=0.112,P=0.738)。
　　 2.EMT調(diào)控因子及侵襲相關(guān)蛋白在HC

4、C中的表達(dá)及其與復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　 2.1 EMT調(diào)控因子在HCC中的表達(dá):
　　 2.1.1 Twist1陽性表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色,主要定位于肝癌細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞核,呈彌漫分布。復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組Twist1細(xì)胞核陽性表達(dá)率為48.98％(24/49),無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組為18.75％(9/48),復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組Twist1細(xì)胞核表達(dá)高于無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.871,P=0.002)。采用Mattern積分法,T

5、wist1細(xì)胞漿表達(dá)量在復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組和無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組兩組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組高于無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組(Z=-3.619,P=0.000)。
　　 2.1.2 Twist2呈陽性表達(dá)于肝癌細(xì)胞的胞漿中,彌漫分布。復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組Twist2的陽性表達(dá)率為57.14％(28/49),無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為50％(24/48),鏡下采用Mattern積分法,所得的Twist2在兩組間的表達(dá)量的差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-0.2

6、39,P=0.811)。
　　 2.1.3 Snail作為鋅指結(jié)構(gòu)家族重要成員,主要表達(dá)于肝癌細(xì)胞的細(xì)胞核中,呈彌漫分布。復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率為69.39％(34/49),無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為47.92％(23/48),復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組Snail陽性表達(dá)率高于無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組(x2=4.613,P=0.032)。
　　 2.1.4 Slug作為Snail同家族的分子,它表達(dá)于肝癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和部分細(xì)胞漿以及部分血管的

7、內(nèi)皮細(xì)胞,復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組Slug的陽性表達(dá)率為67.35％(33/49),無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率50％(24/48),采用Mattern積分法,Slug在兩組間表達(dá)量的差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.911,P=0.056)。
　　 2.2粘附分子在HCC中的表達(dá)
　　 E-cadherin是重要的上皮粘附分子,它表達(dá)于肝癌細(xì)胞的細(xì)胞膜,部分肝癌組織表達(dá)減少,有的肝癌組織表達(dá)缺失。復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率為44.90％(

8、22/49),無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為56.25％(27/48),采用Mattern積分法,E-cadherin在兩組間表達(dá)量的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-2.205,P=0.027),E-cadherin在復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的表達(dá)低于無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組。
　　 2.3基質(zhì)金屬蛋白酶在HCC中的表達(dá)
　　 2.3.1 MMP-2作為基質(zhì)金屬蛋白酶家族重要的成員之一,與侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān),它表達(dá)于肝癌細(xì)胞的細(xì)胞漿中。復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的陽

9、性表達(dá)率為69.39％(34/49),無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為75％(36/48),鏡下采用Mattern法,MMP-2在兩組間表達(dá)量的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-2.623,P=0.009),MMP-2在復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的表達(dá)高于無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組。
　　 2.3.2 MMP-9表達(dá)于肝癌細(xì)胞的胞漿中,少數(shù)病例出現(xiàn)細(xì)胞核表達(dá)。復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為67.35％(33/49),無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率58.33％(28/48),鏡

10、下采用Mattern積分法,MMP-9在兩組間表達(dá)量的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-2.028,P=0.043),MMP-9在復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組的表達(dá)高于無復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組。
　　 3.EMT調(diào)控因子及侵襲相關(guān)蛋白在HCC中之間的相互關(guān)系
　　 在復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移組,從各分子陽性率分析它們之間的相互關(guān)系得出,Twist1在細(xì)胞核中的表達(dá)與E-cadherin成負(fù)相關(guān)(P=0.043),與MMP-9成正相關(guān)(P=0.047),Twist1細(xì)胞

11、核陽性率越高,MMP-9的陽性率越高,E-cadherin的陽性率越低；Snail細(xì)胞核表達(dá)與E-cadherin成負(fù)相關(guān)(P=0.048),Snail細(xì)胞核陽性率越高,E-cadherin陽性率越低,而Twist2和Slug與E-cadherin、MMP-2、MMP-9均無關(guān)(P>0.05)。
　　 4.EMT調(diào)控因子及侵襲相關(guān)蛋白與生存預(yù)后的關(guān)系:
　　 4.1單因素生存分析:Twist1細(xì)胞核表達(dá)、細(xì)胞漿表達(dá)、Sn

12、ail、E-cadherin和MMP-9陽性組病人與陰性組病人生存時(shí)間比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,Twist1-nuclear、Twist1-cytoplasm、Snail和MMP-9陽性組的生存時(shí)間較陰性組病人的生存時(shí)間少(P=0.000,P=0.002,P=0.028,P=0.039),E-cadherin陰性組的生存時(shí)間較陽性組少(P=0.002)。而Twist2、Slug、MMP-2陽性組病人與陰性組病人生存時(shí)間比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

13、(P=0.336,P=0.293,P=0.805)。
　　 4.2 EMT調(diào)控因子復(fù)合表達(dá)生存分析:Twist1、Twist2、Snail和Slug作為EMT過程的上游因子,在不同分子之間的復(fù)合表達(dá)中,存在Twist1或Snail的復(fù)合表達(dá)中,雙陽性組病人的生存時(shí)間較雙陰性組短,Twist1-nuclear和Snail雙陽性組病人的生存時(shí)間較雙陰性病人的生存時(shí)間(P=0.000),Twist1-cytoplasm和Snail雙陽

14、性病人的生存時(shí)間較雙陰性病人的生存時(shí)間短(P=0.001),且Twist1和Snail雙陽性組病人的生存時(shí)間最短。
　　 4.3 EMT調(diào)控因子COX回歸分析:Twist1細(xì)胞核、細(xì)胞漿表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn)度分別是2.110和1.952,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015,P=0.029)。Snail的風(fēng)險(xiǎn)度是1.743,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.063)。
　　 結(jié)論：
　　 1.HCC的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移和腫瘤體積、臨床分期、病理分級(jí)

15、密切相關(guān),和性別、年齡無關(guān)。腫瘤體積越大,復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移率越高,腫瘤臨床分期越晚、病理分級(jí)越高,越容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。
　　 2.在HCC中,bHLH家族轉(zhuǎn)錄因子Twist1通過與E-cadherin的E-box結(jié)合下調(diào)E-cadherin的表達(dá),E-cadherin的表達(dá)減少或缺失以致肝癌細(xì)胞極性消失,細(xì)胞間的粘附性下降,同時(shí)激活基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá),降解細(xì)胞外基質(zhì),促進(jìn)肝癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移,從而導(dǎo)致病人的不良預(yù)后,鋅指結(jié)構(gòu)蛋白Sna

16、il通過與E-cadherin的E-box結(jié)合下調(diào)E-cadherin的表達(dá),E-cadherin的表達(dá)減少或缺失以致肝癌細(xì)胞極性消失,細(xì)胞間的粘附性下降,促進(jìn)癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移,與患者的不良預(yù)后有關(guān)。而Twist2和Slug與HCC的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后無關(guān)。
　　 3.EMT調(diào)控因子中Twist1、Snail表達(dá)與預(yù)后密切相關(guān),Twist2和Slug的表達(dá)與預(yù)后無關(guān),且Twist1和Snail復(fù)合表達(dá)導(dǎo)致了病人更差的預(yù)后,二者復(fù)合表