高生物安全性內(nèi)皮抑素（endostatin）表達(dá)載體對卵巢癌模型抑制作用的動物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一,血管生成在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中起重要作用.以腫瘤新生血管為靶點(diǎn)的抗腫瘤血管生成療法成為目前研究的熱點(diǎn).內(nèi)皮抑素(endostatin)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)源性血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的強(qiáng)效抑制劑,能特異性抑制處于增殖狀態(tài)的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞,并伴有誘導(dǎo)凋亡的作用.本研究的目的是利用已構(gòu)建的高生物安全性的endostatin真核表達(dá)載體PVAX-sEn,通過在體外研究PVAX-sEn對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞及對

2、荷卵巢癌細(xì)胞裸鼠的抑制作用,為臨床上卵巢癌基因介入治療新方案的實(shí)施提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:1、利用新型表皮皮生長因子受體(EGFR)介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)-四元復(fù)合體介導(dǎo)PVAX-sEn轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞系3AO,72h收集細(xì)胞上清:2、利用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測PVAX-sEn轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清對人臍靜脈細(xì)胞系ECV-204的抑制作用:3、采用3AO細(xì)胞給裸鼠腋下皮下接種制備卵巢癌移植瘤動物模型,利用四元復(fù)合體介導(dǎo)PVAX-sEn瘤內(nèi)

3、注射,5 μg/只鼠,每周2次,共4次,觀察其對卵巢癌生長的抑制作用.4、取瘤體利用流式細(xì)胞儀檢測PVAX-sEn基因轉(zhuǎn)染對腫瘤細(xì)胞細(xì)胞周期的影響.5、取瘤體利用免疫組化法檢測腫瘤微血管密度.6、取全身重要臟器進(jìn)行病理檢測,觀察PVAX-sEn基因轉(zhuǎn)染對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響.結(jié)論:1、重組endostatin表達(dá)載體PVAX-sEn在體外可有效抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系ECV一204的增殖.2、PVAX-sEn可有效抑制荷瘤裸鼠的生長,并可誘