熱休克反應(yīng)對小鼠巨噬細胞IL-18基因表達調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、該文研究了熱休克反應(yīng)對LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細胞中IL-18表達的調(diào)節(jié)效應(yīng).43℃熱休克處理顯著抑制了LPS引起的小鼠腹腔巨噬細胞和小鼠巨噬細胞株RAW264.7中IL-18 mRNA和蛋白水平的增加,這一發(fā)現(xiàn)為熱休克反應(yīng)抗炎癥的機制增添了新的內(nèi)容.在上述工作的基礎(chǔ)上,我們進一步探索了熱休克反應(yīng)抑制IL-18基因表達的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制.我們用各種信號通路抑制劑預(yù)處理巨噬細胞后檢測IL-18的表達情況,結(jié)果表明JNK MAPK的抑制劑WP600

2、125以劑量依賴的方式抑制IL-18 mRNA的轉(zhuǎn)錄.為了驗證熱休克反應(yīng)對IL-18的抑制與JNK失活的相關(guān)性,我們應(yīng)用Western blot和激酶分析檢查了熱休克反應(yīng)中JNK的活性.結(jié)果顯示,熱休克反應(yīng)降低了LPS誘導(dǎo)的JNK激酶及其下游底物c-Jun的磷酸化水平.IL-18基因的表達受到許多轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié).其中,AP-1對IL-18的表達起正調(diào)節(jié)作用,它結(jié)合到IL-18啟動子上游-1120到-1083之間的TGA(C/G)TCA序

3、列上,調(diào)節(jié)-1120的表達.AP-1是Jun同二聚體或Jun/Fos異二聚體復(fù)合物,是JNK激酶信號通路的下游底物.我們推測熱休克反應(yīng)引起JNK活性的下降可能導(dǎo)致AP-1 DNA結(jié)合活性的降低,運用EMSA技術(shù)對細胞核中AP-1蛋白與IL-18啟動子上DNA序列的結(jié)合能力進行了測定,結(jié)果表明熱休克和JNK MAPK的抑制劑SP600125對JNK活性的抑制降低了AP-1與IL-18啟動子上-1120到-1083的DNA序列的結(jié)合.這些結(jié)