大敗毒膠囊質(zhì)量標準研究.pdf

1、大敗毒膠囊由蒲公英、大黃、黃柏、赤芍、金銀花、陳皮等十七味中藥組成，屬藥品注冊10類品種。具有清血敗毒，消腫止痛的功效。原品種只有大黃和黃柏的定性鑒別，沒有含量測定，為更好地控制藥品內(nèi)在質(zhì)量，使本品具有安全、有效、穩(wěn)定、可控的基本的藥品特性，確保療效，本課題對大敗毒膠囊與質(zhì)量有關的質(zhì)量標準項目及穩(wěn)定性進行了研究。通過反復試驗，克服了因制劑組方大、藥味多、成分復雜的困難，針對組成藥味的特點和藥物之間的干擾情況，首先制訂原粉入藥的天花粉的顯

2、微鑒別方法，然后優(yōu)選出最佳試驗條件，制訂了大黃、黃柏、赤芍、白芷、陳皮、甘草的薄層鑒別方法，最后，對制劑進行充分研究和預試后，用高效液相色譜法對組方中大黃主要有效成分大黃素及赤芍主要有效成分芍藥苷進行含量測定，在此基礎上進行制劑穩(wěn)定性研究，擬定出合理的效期。該課題制訂的大敗毒膠囊質(zhì)量標準不但精密度高、準確度高、重現(xiàn)性好、經(jīng)濟簡捷、可行性強，而且具有權威性、科學性、和進展性，能確保臨床療效和用藥的安全。 第一部分大敗毒膠囊的鑒別1

3、大敗毒膠囊的顯微鑒別目的：建立大敗毒膠囊中天花粉顯微鑒別方法。方法：取大敗毒膠囊內(nèi)容物適量，加水合氯醛透化后，置顯微鏡下觀察。 結果：可見類球形、半圓形、或盔帽形淀粉粒，直徑6-48μm，臍點點狀、短縫狀或人字狀，層紋隱約可見；石細胞長方形、橢圓形，類方形、多角形或紡錘形，直徑27-72μm，壁較厚，紋孔細密。 結論：大敗毒膠囊中天花粉的顯微鑒別特征性強、重現(xiàn)性好，可作為質(zhì)量控制指標之一。 2大敗毒膠囊的薄層鑒別

4、目的：建立大敗毒膠囊特征性薄層層析方法。方法：按君、臣、佐、使的配伍關系及藥味中有效成分的理化性質(zhì)，制訂了大黃、黃柏、赤芍、白芷、陳皮、甘草的薄層鑒別方法。 2.1大黃的鑒別：取本品內(nèi)容物加氯仿、鹽酸提取濃縮后作為供試品，同法制備大黃對照藥材溶液及缺大黃的陰性樣品溶液。照薄層色譜法吸取上述三種溶液于硅膠G板，石油醚-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)展開，置紫外光燈(365nm)下檢視。 2.2黃柏的鑒別：取本品內(nèi)容物甲醇超

5、聲作為供試品溶液。同法制成黃柏對照藥材溶液及缺黃柏的陰性樣品溶液。取鹽酸小檗堿制成對照品溶液。照薄層色譜法吸取上述四種溶液于硅膠G板，正丁醇-冰醋酸-水(7：1：2)展開，置紫外光燈(365nm)下檢視。 2.3赤芍的鑒別：取本品內(nèi)容物提取并精制作為供試品溶液。取芍藥苷對照品制成對照品溶液。按供試品制備方法同法制備缺赤芍的陰性樣品溶液。照薄層色譜法吸取三種溶液于硅膠G板，乙酸乙酯—乙醇—水(10：2.5：2)展開，噴以5％香草醛

6、硫酸試液，熱風吹至顯色清晰。 2.4白芷的鑒別：取本品內(nèi)容物石油醚超聲作為供試品溶液。同法制備白芷對照藥材溶液及缺白芷的陰性樣品溶液。照薄層色譜法吸取上述三種溶液于硅膠G板，石油醚(60-90℃)-乙醚(3：2)展開，置紫外光燈(365nm)下檢視。 2.5陳皮的鑒別：取本品內(nèi)容物乙醇超聲精制作為供試品溶液。取橙皮苷對照品制成對照品溶液。按供試品制備方法制備缺陳皮的陰性樣品溶液。照薄層色譜法吸取上述三種溶液于硅膠G板，乙

7、酸乙酯-乙醇-水(10：2.5：2)展開，置紫外光燈(365nm)下檢視。 2.6甘草的鑒別：取本品內(nèi)容物乙醇超聲精制作為供試品溶液。同法制備甘草對照藥材溶液及缺甘草的陰性樣品溶液。照薄層色譜法吸取上述三種溶液于硅膠G板，乙酸乙酯-乙醇-水(10：2.5：2)展開，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至顯色清晰。置紫外光燈(254nm)下檢視。 結果：2.1項大黃的鑒別：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的

8、熒光斑點，陰性無干擾。2.2項黃柏的鑒別：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的一個黃色熒光斑點，陰性無干擾。2.3項赤芍的鑒別：供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的藍紫色斑點，陰性無干擾。2.4項白芷的鑒別：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾。2.5項陳皮的鑒別：在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰

9、性無干擾。2.6項甘草的鑒別：在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾。 結論：大敗毒膠囊中大黃、黃柏、赤芍、白芷、甘草的薄層鑒別方法均分離度好、特征性強、靈敏度高、重現(xiàn)性好，能作為本制劑的質(zhì)量控制方法。 第二部分大敗毒膠囊的含量測定1大敗毒膠囊大黃中大黃素的含量測定目的：建立大敗毒膠囊君藥大黃主要有效成分大黃素含量測定方法。 方法：取樣品，加甲醇回流提取后加酸水解，制備供試品溶液。取大黃素

10、對照品，加甲醇溶解制備對照品溶液。再按供試品制備方法制備缺大黃的陰性樣品溶液。用反相高效液相色譜法測定大黃素的含量。 色譜條件的選擇：用紫外分光光度計掃描法確定大黃素的檢定波長，通過不同的試驗篩選最佳分離條件。方法學考察：(1)標準曲線制備：取不同濃度的大黃素對照品溶液，分別注入色譜儀，測定峰面積。以峰面積為橫坐標，對照品大黃素的量為縱坐標，繪制標準曲線，得出回歸方程。(2)穩(wěn)定性試驗：分別于0、1、3、3.5、4、4.5、5h

11、測定供試品溶液峰面積。(3)重現(xiàn)性試驗：取同一批樣品，平行測定5次。(4)精密度試驗：取同一大黃素標準品連續(xù)測定5次。(5)回收率試驗：取已知含量的樣品，精密加入大黃素對照品后，按樣品制備方法制備樣品，測定含量，計算回收率。 結果：通過紫外掃描結果選擇438nm為測定大黃素的檢測波長。用C18色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)；乙腈-水-冰乙酸(68：32：1)為流動相；柱溫：室溫；流速0.4ml/min。大黃素分離度好，

12、柱效高，對稱性好，大黃素在0.0522-0.522μg范圍內(nèi)有良好的線性關系?；貧w方程為含量=面積×1.222×10-7-2.022×10-3，回歸系數(shù)：r=0.9996。樣品在5小時內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.7％；精密度高，RSD為0.31％；重現(xiàn)性好：RSD為0.25％；平均回收率為98.91％，RSD為1.66％。 結論：用該方法測定大黃素含量準確度高、精密度好、簡便快捷，可用于大敗毒膠囊中大黃素的含量測定。2大敗毒膠囊赤藥中芍

13、藥苷的含量測定 目的：建立大敗毒膠囊臣藥赤芍主要有效成分芍藥苷含量測定方法。 方法：取樣品，加稀乙醇超聲提取，制備供試品溶液。并按供試品制備方法制備缺赤芍的陰性樣品溶液。取芍藥苷對照品，加稀乙醇溶解制備對照品溶液。用反相高效液相色譜法測定芍藥苷的含量。 色譜條件的選擇：用紫外分光光度計掃描法確定芍藥苷的測定波長，通過不同的試驗篩選最佳分離條件。方法學考察：(1)標準曲線制備：取不同濃度的芍藥苷對照品溶液，分別注入

14、色譜儀，測定峰面積。以峰面積為橫坐標，對照品芍藥苷的量為縱坐標，繪制標準曲線，得出回歸方程。(2)穩(wěn)定性試驗：將供試品溶液分別于不同時間測定其峰面積。(3)重現(xiàn)性試驗：取同一批樣品，平行測定5次。(4)精密度試驗：取同一芍藥苷標準品連續(xù)測定5次。(5)回收率試驗：取已知含量的樣品，精密加入芍藥苷對照品后，按樣品制備方法制備樣品，測定含量，計算回收率。 結果：通過紫外掃描結果選擇230nm為芍藥苷的檢測波長。用C18色譜柱(4.6

15、mm×200mm，5μm)；乙腈-0.1％磷酸(13：87)為流動相；柱溫：室溫；流速0.85ml/min。芍藥苷分離度好，柱效高，對稱性好，芍藥苷在0.08g-1.080μg范圍內(nèi)有良好的線性關系?；貧w方程為含量=面積×3.126×10-7+5.583×10-3，回歸系數(shù)：r=0.9999。樣品在5小時內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.68％；精密度高，RSD為0.50％；重現(xiàn)性好：RSD為0.88％；回收率符合規(guī)定：RSD為0.89％。

16、結論：用該方法測定芍藥苷含量準確度高、精密性好、簡便快捷，可用于大敗毒膠囊中芍藥苷的含量測定。第三部分穩(wěn)定性試驗 目的：通過穩(wěn)定性試驗，考察大敗毒膠囊在高溫、高濕的影響下隨時間變化的情況，確定藥品的有效期，同時為藥品的生產(chǎn)、包裝、貯藏、運輸提供科學依據(jù)。 方法：按中國藥典2000年版附錄ⅩⅨC項下穩(wěn)定性試驗指導原則，取三批樣品，模擬上市包裝，進行加速試驗及長期留樣試驗，考察大敗毒膠囊的穩(wěn)定性。結果：加速試驗及長期留樣試驗