CGRP和IB4(+)C纖維在神經(jīng)病理性疼痛陽—陰性癥狀中的作用.pdf

1、目的：
　　神經(jīng)病理性疼痛的外在表現(xiàn)既包含以痛覺過敏為特點(diǎn)的陽性癥狀也可能伴隨以痛覺減退為特點(diǎn)的陰性癥狀，而同時(shí)伴隨不同種類的陽性和陰性癥狀的神經(jīng)病理性疼痛最為常見。探索可能導(dǎo)致不同癥狀的神經(jīng)病理改變，是完善神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制并進(jìn)行針對(duì)性治療的必要條件。本研究采用應(yīng)用不同的壓力一過性擠壓大鼠坐骨神經(jīng)，構(gòu)建復(fù)合神經(jīng)病理性疼痛陽性和陰性癥狀的動(dòng)物模型，并與經(jīng)典的坐骨神經(jīng)慢性縮窄傷(CCI)模型作對(duì)比。系統(tǒng)評(píng)估這兩個(gè)模型大鼠熱痛覺、

2、冷痛覺、靜態(tài)和動(dòng)態(tài)機(jī)械痛覺以及疼痛相關(guān)行為等神經(jīng)病理性疼痛表現(xiàn)，并分析外周傳入神經(jīng)纖維，背根神經(jīng)節(jié)及其脊髓背角投射這一神經(jīng)傳導(dǎo)通路上IB4和CGRP的表達(dá)變化，探索CGRP和IB4免疫陽性神經(jīng)傳導(dǎo)通路對(duì)大鼠神經(jīng)病理性疼痛陽性或陰性癥狀的不同調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　1.體重200～250g成年雄性SD大鼠24只，隨機(jī)分為4組:Sham(n=6)、100g組(n=6)、400g組(n=6)和CCI組(n=6)。Sham組僅暴

3、露左側(cè)坐骨神經(jīng)而不結(jié)扎，100g組和400g組分別以100g和400g的壓力壓迫大鼠坐骨神經(jīng)3*10s，CCI組建立左側(cè)CCI模型，術(shù)前1天及術(shù)后3、7、10、14、21、28天分別測(cè)定左足內(nèi)外側(cè)及右足內(nèi)外側(cè)機(jī)械痛閾和熱痛閾和并對(duì)左右足的冷痛覺，動(dòng)態(tài)觸覺及自噬行為和疼痛行為等進(jìn)行評(píng)價(jià)，術(shù)后3、10、21、28天分批灌注處死，取左側(cè)坐骨神經(jīng)、左側(cè)腰5背根節(jié)及腰膨大處脊髓，多聚甲醛固定過夜。
　　2.取以上4組大鼠3、10、21、28

4、天腰5背根節(jié)，OCT包埋，取200微米、250微米、300微米處切面，行雙標(biāo)免疫熒光染色，計(jì)算背根節(jié)中陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)，比較各時(shí)間點(diǎn)不伺組之間的陽性細(xì)胞數(shù)差異。取以上4組大鼠3、10、21、28天腰膨大處脊髓（約L4、L5節(jié)段），OCT包埋后行雙標(biāo)免疫熒光染色，計(jì)算同側(cè)及對(duì)側(cè)板層Ⅱ內(nèi)IB4纖維面積及CGRP纖維面積。取以上4組大鼠10天坐骨神經(jīng)，行波蒂安銀染，比較4組神經(jīng)纖維密度。
　　結(jié)果：
　　1.與D0天相比，100g組和

5、CCI組先后出現(xiàn)了熱痛和機(jī)械痛的痛覺過敏(P＜0.05)，冷痛覺、動(dòng)態(tài)觸覺和疼痛相關(guān)行為的評(píng)分也較D0天增高。與100g組和CCI組相反，400g組出現(xiàn)了明顯的痛覺減退，表現(xiàn)為熱痛閾和機(jī)械痛閾升高(P＜0.05)，盡管冷痛覺、動(dòng)態(tài)觸覺和疼痛相關(guān)行為的評(píng)分也一定程度的升高，但重觸覺的變化卻沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.在背根節(jié)中，與Sham組相比，100g組和CCI組的IB4和CGRP陽性細(xì)胞數(shù)出現(xiàn)了短暫的減少，而400

6、g的IB4和CGRP陽性細(xì)胞數(shù)出現(xiàn)了持久的、難以恢復(fù)的減少。在脊髓當(dāng)中，與對(duì)側(cè)相比，100g組、400g和CCI組腰膨大板層Ⅱ中的IB4纖維均出現(xiàn)了減少，但只有400g組的CGRP纖維出現(xiàn)了明顯的減少(P＜0.05)，而100g組和CCI組的CGRP纖維面積沒有出現(xiàn)變化。在坐骨神經(jīng)中，波蒂安銀染顯示400g組第10天的神經(jīng)纖維明顯較另外兩組和sham組稀疏。
　　結(jié)論：
　　1.100g壓力一過性擠壓大鼠坐骨神經(jīng)產(chǎn)生與CCI