氫氣對低壓低氧環(huán)境中雄性大鼠生殖功能的防護研究.pdf

1、目的:
　　本課題旨在利用氫氣的選擇性抗氧化特性，通過動物實驗，研究探索高原低壓低氧環(huán)境導(dǎo)致雄性生殖健康損傷過程中活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）的作用機制，以及氫氣對雄性生殖系統(tǒng)損傷的防護效果。
　　方法:
　　1．將48只成年雄性Wistar大鼠隨機分為空白對照組（C），低壓低氧模型組（H），低壓低氧和生理鹽水干預(yù)組（HS），低壓低氧和氫氣飽和生理鹽水干預(yù)組（HH），各組又分為15d

2、組和30d組。其中C組在低壓氧艙外飼養(yǎng)，其余各組均在低壓氧艙中飼養(yǎng)，用低壓氧艙模擬海拔6000m環(huán)境。在低壓氧艙干預(yù)的同時，HS組腹腔注射生理鹽水（10ml/Kg/d），HH組腹腔注射氫氣飽和生理鹽水（10ml/Kg/d）。
　　2．干預(yù)期滿后，取大鼠睪丸組織，常規(guī)蘇木素-伊紅（HE）染色，在光鏡下觀察大鼠睪丸組織形態(tài)改變，在透射電鏡（Transmission Electron Microscope，TEM）下觀察大鼠睪丸超微組織

3、結(jié)構(gòu)變化。
　　3．取大鼠雙側(cè)附睪尾制成精子懸液，在相差顯微鏡下檢測精子濃度，觀察精子活力，采用低滲膨脹（Hypo-osmotic Swelling，HOS）實驗檢測精子存活率，采用Diff-Quik快速染色法，觀察分析異常形態(tài)精子所占比例。
　　4．取大鼠血清，采用固相免疫放射法檢測血清中睪酮（Testosterone，T）、黃體生成素（Luteinizing Hormones，LH）、促卵泡生成激素（Follicle S

4、timulating Hormone，F(xiàn)SH）等性激素水平。
　　5．按照試劑盒說明書，檢測大鼠血清中羥自由基（Hydroxyl radical，?OH）生成能力和脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的含量，同時檢測大鼠血清總抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity，T-AOC）的水平。
　　結(jié)果:
　　1．HE染色結(jié)果顯示，H15d組與C15d組相比，生精小管管壁

5、褶皺，生精上皮變薄，生精細胞排列紊亂，數(shù)量顯著減少，H30d組與H15d組相比,生精上皮又復(fù)增厚，生精細胞數(shù)量也趨增多，但上皮內(nèi)可見空泡樣變。HS組與H組相比未見顯著差異。HH15d組與H15d組和HS15d組相比，生精細胞數(shù)量增多，細胞極性規(guī)則，HH30d組生精上皮也呈增厚改變，管腔內(nèi)生精細胞形態(tài)規(guī)則，胞核飽滿。
　　2．透射電鏡檢查結(jié)果顯示，H15d組與C15d組相比，大鼠睪丸支持細胞變性壞死，與精原細胞界限不清，精原細胞胞核

6、不規(guī)則，線粒體呈空泡化改變，嵴排列紊亂，細胞間的緊密連接多被破壞；H30d組與H15d組相比，可見支持細胞胞核規(guī)整，核仁清晰，但初級精母細胞線粒體仍然呈空泡化改變，并伴有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張；HS組與H組相比未見顯著差異；HH15d組支持細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，精原細胞線粒體密度正常，細胞間界限清晰，HH30d組大鼠睪丸支持細胞與生精細胞連接緊密，但初級精母細胞中依舊可見線粒體空泡。
　　3．大鼠附睪尾精子懸液檢測結(jié)果顯示，H組大鼠精子濃度、總活

7、動率、存活率均低于C組（P＜0.01），異常形態(tài)精子較多（P＜0.01），HS組與H組相比無顯著性差異，而HH15d組與H15d組相比，精子濃度、總活動率和存活率均顯著升高（P＜0.01），異常形態(tài)精子百分率顯著下降（P＜0.01），HH30d與HS30d組相比，精子濃度和精子總活動率明顯較高（P＜0.05）。
　　4．大鼠血清性激素檢測結(jié)果顯示，H15d組FSH水平與C15d相比顯著降低（P＜0.01），H30d組T和FSH水平

8、明顯較低（P＜0.05）。HS組與H組相比未見顯著差異，HH組與H組和HS組相比,也未見顯著性差異。
　　5．血清·OH、MDA、T-AOC檢測結(jié)果顯示，H組與C組相比，·OH、MDA、T-AOC均顯著升高（其中H15d組·OH與C15d組相比P＜0.05，H30d組T-AOC與C30d組相比P＜0.05，其余均為P＜0.01），HS組與H組相比多未見顯著差異。HH組與H組相比，多顯示·OH、MDA、T-AOC顯著降低（其中HH1

9、5d組·OH與HS15d組相比P＜0.05，HH30d組·OH與H30d組相比P＜0.05，與HS30d組相比P＜0.01，HH30d組MDA與H30d組相比P＜0.01，HH15d組T-AOC與H15d組相比P＜0.05，與HS15d組相比P＜0.01，HH30d組T-AOC與HS30d組相比P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1．低壓低氧環(huán)境可導(dǎo)致雄性生殖系統(tǒng)損傷及功能障礙；
　　2．低壓低氧環(huán)境中機體內(nèi)的ROS增多