糖尿病大鼠腎組織SOD,MDA和NO的表這及丹紅注射液和二甲雙胍的干預(yù)作用.pdf

1、目的:
　　研究表明，約30-40％的糖尿病(diabetesmellitus，DM)患者合并糖尿病腎?。╠iabeticnephropathy，DN）。近年，大量研究表明，氧化應(yīng)激參與了DM及DN的發(fā)生、發(fā)展。高血糖狀態(tài)下，大量超氧化物(reactiveoxygenspecies，ROS)的生成以及氧化還原平衡的失調(diào)介導(dǎo)了氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)使超氧化物陰離子（O2-）發(fā)

2、生歧化反應(yīng)生成H2O2，后者進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)镠2O和O2，是抗氧化還原體系重要的組成部分。因此SOD是評(píng)估機(jī)體抗氧化防御體系功能的重要指標(biāo)。氧化應(yīng)激狀態(tài)下脂質(zhì)、蛋白質(zhì)發(fā)生過氧化，繼而造成細(xì)胞、組織損傷。丙二醛(methanedicarboxylicaldehyde，MDA)是細(xì)胞多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的主要終產(chǎn)物，測(cè)定MDA有助于評(píng)估組織氧化損傷的程度。目前研究認(rèn)為，腎小球高濾過狀態(tài)是電腦發(fā)生的始動(dòng)因素。研究發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病早期一氧化氮

3、(nitricoxide，NO)水平升高，提示早期NO產(chǎn)生增多是腎臟血流動(dòng)力學(xué)異常形成的重要機(jī)制之一。丹紅注射液(Danhonginjection，DHI)是傳統(tǒng)中藥制劑，具有協(xié)同抗炎、抗氧化、抗凋亡等心血管保護(hù)作用，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于治療心腦血管疾病。近年臨床上已將DHI用以協(xié)同治療DM及其并發(fā)癥，均取得良好療效，但具體機(jī)制尚未闡明。二甲雙胍因其調(diào)節(jié)血糖、改善胰島素抵抗的作用被廣泛應(yīng)用于DM，近年研究顯示其具有腎臟保護(hù)作用。本研究通過給予

4、SD大鼠一次性腹腔大量注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)的方法，建立1型DM大鼠模型，并應(yīng)用DHI和二甲雙胍進(jìn)行干預(yù)，通過病理形態(tài)學(xué)、比色法等方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腎臟組織中SOD的活性，MDA和NO的含量，來探討氧化應(yīng)激和腎小球高濾過在DN發(fā)生發(fā)展中的作用以及DHI和二甲雙胍的腎臟保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法:
　　從48只雄性SD大鼠中隨機(jī)抽取10只作為正常對(duì)照組（A組），其余作為實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組大鼠給予一次性大

5、劑量(55mg/kg)STZ腹腔注射。72h小時(shí)后，尾靜脈采血測(cè)定血糖(bloodglucose，BG)大于16.7mmol/L，持續(xù)3天，作為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。把成模大鼠隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組(B組)、糖尿病丹紅注射液(2ml/kg.d)干預(yù)組（C組）、糖尿病二甲雙胍（300mg/kg.d）干預(yù)組（D組）。實(shí)驗(yàn)藥物干預(yù)為期8周。分別于造模前、第8周末測(cè)定大鼠血糖和體重;實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，準(zhǔn)確收集24小時(shí)尿液，用放射免疫法測(cè)定24小時(shí)尿白蛋白定量

6、;于第8周末，測(cè)定血清肌酐(serumcreatinine，Scr)、尿素氮(bloodureanitrogen，BUN)、甘油三酯(serumtriglyceride，TG)、總膽固醇(totalcholesterol，TC)、低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)水平;取出大鼠雙腎，除去包膜，左腎進(jìn)行病理學(xué)蘇木素-伊紅染色(hematoxylin-eosinstaining，H.E)觀察腎臟形態(tài)學(xué)變化，右

7、腎制備腎組織勻漿，分別測(cè)定SOD活性、MDA含量和NO含量。使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，各組數(shù)據(jù)比較前先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，符合方差齊性的數(shù)據(jù)多組比較采用方差分析（ANOVA），不符合方差齊性的數(shù)據(jù)采用非參數(shù)檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)第8周末各組大鼠體重、血糖:與A組比較，B組、C組和D組體重均明顯下降（均P＜0.01），B組、C組、D組三組之間比較體重?zé)o顯著性差異（均P＞0.05）。與A組比較，B組、C組

8、、D組血糖水平均明顯升高（均P＜0.01），B組、C組之間比較血糖無顯著性差異(P＞0.05)，D組血糖較B組明顯下降(P＜0.01)。
　　2、實(shí)驗(yàn)第8周末各組大鼠生化指標(biāo):與A組比較，B組、C組、D組大鼠TC、TG、LDL水平均明顯升高（均P＜0.01）。與B組比較，C組、D組TC、TG、LDL水平均明顯下降（均P＜0.01）。與A組比較，B組、C組、D組大鼠BUN、Scr均明顯升高（均P＜0.01）。與B組比較，C組BUN、

9、Scr均明顯下降(P＜0.05，P＜0.01)，D組BUN、Scr均明顯下降（均P＜0.01）。
　　3、實(shí)驗(yàn)第8周末各組大鼠24小時(shí)尿白蛋白定量、24小時(shí)尿量和腎臟肥大指數(shù):與A組比較，B組、C組、D組大鼠24小時(shí)尿白蛋白定量、24小時(shí)尿量和腎臟肥大指數(shù)均明顯升高（均P＜0.01）。與B組比較，C組24小時(shí)尿白蛋白定量、24小時(shí)尿量和腎臟肥大指數(shù)均明顯下降(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.05)，D組24小時(shí)尿白蛋白定量和腎

10、臟肥大指數(shù)均明顯下降（均P＜0.01）。B組、D組之間比較24小時(shí)尿量無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4、實(shí)驗(yàn)第8周末各組大鼠氧化應(yīng)激相關(guān)參數(shù):與A組比較，B組大鼠SOD活性明顯減弱(P＜0.01)，A組、C組、D組間比較SOD活性無顯著性差異（均P＞0.05）。與B組比較，C組、D組SOD活性均明顯增強(qiáng)（均P＜0.01）。與A組比較，B組、D組MDA含量均明顯升高（均P＜0.01），A組、C組間之間比較MDA含量無顯著性差異

11、(P＞0.05)。與B組比較，C組、D組MDA含量均明顯下降（均P＜0.01）。與A組比較，B組、C組、D組NO含量均明顯升高（均P＜0.01）。與B組比較，C組、D組NO含量均明顯下降（均P＜0.01）。
　　5、H.E染色:B組大鼠腎小球平均截面積較A組大鼠增大，系膜基質(zhì)增生，部分腎小管萎縮，腎小管上皮細(xì)胞水腫。C組、D組腎小球病變較B組均減輕。
　　結(jié)論:
　　1、與對(duì)照組相比，糖尿病大鼠腎臟SOD活性減弱，MD