脂聯(lián)素和脂聯(lián)素抗體通過(guò)殼聚糖水凝膠對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的影響研究.pdf

1、目的：骨關(guān)節(jié)炎(OA)是常見(jiàn)的關(guān)節(jié)疾病，發(fā)病率高和致殘率較高，并且缺乏有效控制病情或逆轉(zhuǎn)病情的保守治療方法。OA的發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，近年來(lái)不少研究發(fā)現(xiàn)，力學(xué)負(fù)荷超載導(dǎo)致機(jī)械性的軟骨破壞只能部分解釋肥胖與OA的聯(lián)系，肥胖時(shí)異常分泌的脂肪因子可能具有重要的病理生理作用。通過(guò)對(duì)OA發(fā)病機(jī)制的研究，可以發(fā)現(xiàn)OA發(fā)生發(fā)展中的重要作用因子，探索控制病情的治療方案，具有重要的臨床意義。本研究包括兩個(gè)部分：1、研究脂肪因子脂聯(lián)素和脂聯(lián)素單克隆抗體對(duì)

2、軟骨細(xì)胞的影響。2、配制殼聚糖-甘油磷酸二鈉溫敏水凝膠，并評(píng)估其細(xì)胞相容性。
　　 方法：1、培養(yǎng)軟骨細(xì)胞，在鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，并用脂聯(lián)素和脂聯(lián)素單抗刺激細(xì)胞，通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)IL-6和膠原蛋白表達(dá)量。2、配制殼聚糖-甘油磷酸二鈉溫敏水凝膠，研究凝膠的溫敏特性，并通過(guò)CCK-8法評(píng)估其細(xì)胞相容性。
　　 結(jié)果：1、1μg/ml脂聯(lián)素可促使軟骨細(xì)胞表達(dá)大量的IL-6，較對(duì)照組表達(dá)量高110倍(P＜0.001)，通過(guò)換

3、液去除培養(yǎng)基中的脂聯(lián)素后，IL-6的表達(dá)量又明顯下降(P＜0.001)，提示脂聯(lián)素可刺激軟骨細(xì)胞產(chǎn)生IL-6。1μg/ml脂聯(lián)素單抗刺激軟骨后IL-6的表達(dá)量?jī)H稍高于對(duì)照組。質(zhì)量分?jǐn)?shù)相等的脂聯(lián)素和脂聯(lián)素單抗同時(shí)刺激軟骨細(xì)胞，IL-6的表達(dá)量與脂聯(lián)素單獨(dú)刺激軟骨細(xì)胞時(shí)的表達(dá)量無(wú)明顯差異。提示脂聯(lián)素單抗沒(méi)有阻斷脂聯(lián)素與其受體的作用，或者抗體的量相對(duì)于脂聯(lián)素量過(guò)小。Ⅱ型膠原酶的表達(dá)量顯示，脂聯(lián)素減少了軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)，而脂聯(lián)素抗體可

4、以增加Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)量。2、通過(guò)混合不同比例的殼聚糖和甘油磷酸，得到了可以在生理溫度下凝固的水凝膠。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CS含量固定時(shí)，膠凝溫度隨GP的含量增高而降低，膠凝時(shí)間隨GP的含量增高而縮短。通過(guò)CCK-8法評(píng)估CS/GP凝膠的相容性，發(fā)現(xiàn)在不同量凝膠的刺激下，軟骨細(xì)胞均可緩慢的增長(zhǎng)，而細(xì)胞活力在緩慢增長(zhǎng)后出現(xiàn)了緩慢下降的趨勢(shì)。
　　 結(jié)論：1、脂聯(lián)素可致軟骨細(xì)胞IL-6表達(dá)量增高，并且降低了Ⅱ型膠原的表達(dá)，在OA的發(fā)生發(fā)展過(guò)