鹽酸奧布卡因與氧氟沙星對人角膜上皮細胞的凋亡誘導作用研究.pdf

1、隨著醫(yī)藥技術的不斷發(fā)展,目前臨床上可供選擇的眼科用藥越來越多,隨著角膜感染的抗菌藥物、抗病毒藥物以及用于手術中的麻醉劑藥物等的廣泛應用,為臨床治療提供了多種選擇機會,而眼科藥物的毒性作用已引起臨床用藥者的高度重視并成為醫(yī)藥領域的研究課題。大部分的眼科藥物是通過眼表給藥的,極有可能首先會對角膜產生毒副作用,更甚者,可能會致盲。而角膜上皮作為角膜最外層,是防御外界致病因子侵犯的物理屏障,其結構的完整性決定了角膜執(zhí)行正常的生理功能。因此,研究

2、藥物對于人角膜上皮細胞(HCEP)的影響對于制定安全的臨床給藥方案,建立科學的新藥研究模式以及篩選高效、低毒的眼科藥物具有重要的科學意義和應用價值。到目前為止,尚未見常用表面麻醉劑鹽酸奧布卡因與喹諾酮類抗菌藥氧氟沙星對人角膜上皮細胞的毒副作用報道,本文以實驗室自建的非轉染、無致瘤性的HCEP細胞系為研究體系,研究了鹽酸奧布卡因與氧氟沙星對HCEP細胞的凋亡誘導作用。
　　本文分別將臨床濃度為4 g/L的鹽酸奧布卡因倍比稀釋至0.1

3、25 g/L,臨床濃度為3 g/L的氧氟沙星倍比稀釋至0.1875 g/L,對體外培養(yǎng)的HCEP細胞加藥處理,通過倒置顯微鏡觀察細胞的狀態(tài)、MTT檢測細胞的活性,結果表明,鹽酸奧布卡因和氧氟沙星分別在0.5~4 g/L和1.5~3 g/L的濃度范圍內能夠引起HCEP細胞的毒副作用,通過流式細胞儀研究其細胞周期變化,結果顯示1 g/L鹽酸奧布卡因與3 g/L氧氟沙星均使HCEP細胞周期發(fā)生了S期阻滯,為進一步研究這兩種藥物的毒副作用機理,

4、通過AO/EB熒光雙染色法檢測細胞的凋亡率、Annexin V/PI觀察細胞凋亡情況、凝膠電泳檢測 DNA斷片化、以及透射電鏡觀察細胞的超微結構,結果表明,這兩種藥物在上述濃度下均確能引起細胞凋亡,電泳結果中呈現出典型的梯狀條帶,在電鏡中能清楚地觀察到細胞空泡化、染色質固縮和凋亡小體等凋亡細胞的理化特征。本文還進一步探討了這兩種藥物凋亡誘導途徑,通過觀察加藥后HCEP細胞線粒體膜電位變化,以及半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶caspase-

5、2,-3,-9的變化情況,結果顯示,此兩種藥物處理后的HCEP細胞線粒體膜電位均發(fā)生了下降,線粒體均產生了應激反應,而起始者caspase-2,-9在一定時間內濃度增加到最大值并最終激活了執(zhí)行者caspase-3,進一步引起了細胞凋亡。從而,推測出這兩種藥物極有可能通過線粒體途徑誘發(fā)了凋亡作用。
　　本文以自主建立的非轉染、無致瘤性的 HCEP細胞系為研究體系,進行了眼表麻醉劑鹽酸奧布卡因和喹諾酮類抗菌藥氧氟沙星對HCEP細胞凋亡