IL-32誘導TSLP在角膜上皮細胞免疫炎癥反應中的作用.pdf

1、目的：探討白介素-32（Interleukin-32，IL-32）和胸腺基質淋巴細胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)在人角膜上皮細胞炎癥反應中的作用及調(diào)控機制。
　　方法：（1）不同濃度（2、10、50ng/ml）的IL-32刺激人角膜上皮細胞，應用熒光定量PCR和ELISA檢測HCECs中TSLP、IL-6、TNFαmRNA和蛋白的表達變化，同時用免疫組化技術定位TSLP蛋白在人角膜上

2、皮組織中的表達；（2）應用Western blot檢測上述各組角膜上皮細胞中caspase-1的活性，加入caspase-1抑制劑VX-765后分別應用Western blot、熒光定量PCR和ELISA檢測caspase-1活性、TSLP mRNA和蛋白水平的表達變化；（3）用同種型IgG抗體（5μg/mL）、TSLP抗體（5μg/mL）、NF-kB抑制劑喹唑啉（NF-kB-I，10μM）以及caspase-1抑制劑VX-765預處理

3、人角膜上皮細胞1小時，然后用IL-32(10ng/mL)刺激HCECs4小時后應用熒光定量PCR檢測IL-6和TNFαmRNA水平的表達,刺激48小時后用ELISA檢測IL-6和TNFα蛋白水平的表達。
　　結果：（1）IL-32刺激人角膜上皮細胞后可引起TSLP、IL-6、TNFαmRNA和蛋白水平表達升高，呈一定的時間和濃度依賴性，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），TSLP蛋白在未經(jīng)處理的角膜組織細胞質中表達，而在經(jīng)IL-32

4、(50 ng/ml)處理48小時后的供體角膜上皮組織中，TSLP在角膜各層中的表達均顯著增強；（2）IL-32促進caspase-1的活化，并且具有濃度依賴性，加入caspase-1抑制劑后，caspase-1的活性明顯受到抑制，TSLP mRNA和蛋白水平的表達也明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；（3）TSLP抗體、NF-κB抑制劑喹唑啉和caspase-1抑制劑VX-765能夠顯著抑制IL-32介導的促炎因子（TNFα和I