肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)因子Mina和GATA家族轉(zhuǎn)錄因子的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)因子Mina和GATA家族轉(zhuǎn)錄因子的基礎(chǔ)和臨床研究姓名：李藝偉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：樊嘉20120306博士論文中文摘要GATA6主要是內(nèi)胚層因子，被證實在內(nèi)胚層來源器官的正?；蚰[瘤組織中存在差異表達。GATA4、GATA5或GATA6由于啟動子甲基化或核漿轉(zhuǎn)運機制異常導(dǎo)致的異位表達引起的失功能在肺癌、消化道腫瘤和卵巢癌中很常見，它可導(dǎo)致上皮細胞特異性標(biāo)記物失表達而引起細胞去分化或下

2、調(diào)抑癌基因潛在的靶基因。因此，靶向于GATA家族啟動子甲基化或者核漿轉(zhuǎn)運機制異常是潛在的抗癌新療法。肝臟屬于內(nèi)胚層起源器官，來自老鼠胚胎內(nèi)胚層細胞的研究提示，在血清白蛋白基因肝臟特異性轉(zhuǎn)錄增強子區(qū)域存在GATA家族基因特異的結(jié)合位點，這種現(xiàn)象持續(xù)于肝臟發(fā)育的整個過程中，是血清白蛋白基因轉(zhuǎn)錄活性所不可缺少的。目前已有學(xué)者報道GATA家族轉(zhuǎn)錄因子表達于人肝癌細胞系HepRG、HepG2和Hep3B，并且與內(nèi)皮細胞生長因子誘導(dǎo)的核酸切除修復(fù)活

3、性及ERCCl的表達有關(guān)，而后者是鉑類化療在人類多種腫瘤產(chǎn)生耐藥的重要機制之一。然而，目前沒有任何報道研究GATA家族在肝癌和癌旁組織的表達模式及其對肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響。本課題擬研究Mina和GATA家族轉(zhuǎn)錄因子在正常肝和肝癌細胞系的表達；通過高通量組織芯片免疫組化技術(shù)分析它們在肝癌和配對癌旁組織的表達模式、與患者臨床病理特征的關(guān)系及預(yù)后價值：借助慢病毒載體、裸鼠皮下瘤和裸鼠原位瘤模型研究Mina對于肝癌生物學(xué)特性的影響，試圖尋找預(yù)

4、測肝癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移潛在的生物標(biāo)記物。第一部分、肝癌組織Mina表達下降與患者不良預(yù)后相關(guān)目的：研究Mina蛋白在不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞系以及肝癌和配對癌旁組織的表達水平，分析其與肝癌細胞系轉(zhuǎn)移潛能、患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。方法：我們首先通過蛋白免疫印跡和細胞免疫熒光分析Mina蛋白在不同轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞系的表達水平及亞細胞定位，然后通過組織芯片免疫組化技術(shù)分析肝癌和癌旁組織Mina蛋白表達水平與患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)

5、果：Westemblot結(jié)果提示，隨著細胞系轉(zhuǎn)移潛能增高，Mina蛋白表達水平顯著下降(p=0007)，且發(fā)生胞核向胞漿異位表達，這種異位表達現(xiàn)象經(jīng)細胞免疫熒光進一步證實。組織芯片免疫組化結(jié)果提示，Mina蛋白在肝癌組織的表達水平低于配對癌旁組織(陽性率，試驗隊列：癌171／230例，743％VS癌旁229／230例，996％；驗證隊列：癌61／86例，709％vs癌旁85／86例，988％)。在肝癌組織Mina蛋白主要定位于胞漿，而在