健脾理氣中藥對大鼠肝癌微環(huán)境Treg細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：通過觀察健脾理氣中藥對肝癌微環(huán)境中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T，Treg)的影響，探討健脾理氣中藥調(diào)節(jié)肝癌免疫微環(huán)境的Treg細(xì)胞的機(jī)制。
　　 方法：1.分組造模：(1)選6周齡雄性清潔級Wistar大鼠60只，體重140g±10g，隨機(jī)分為正?？瞻捉M、對照組、健脾理氣組3組，每組20只。同一組每5只大鼠分為一籠，標(biāo)記鼠籠。(2)正常組大鼠正常喂養(yǎng)飼料和飲水；對照組和健脾理氣組大鼠一直自由飲用80ppm二乙基亞

2、硝胺(DEN)水溶液。自造模后第16周起進(jìn)行治療，健脾理氣組用健脾理氣中藥(由黨參10g、茯苓20g、白術(shù)20g、淮山20g、陳皮10g、柴胡10g、白芍10g、枳實(shí)10g、甘草10g等九味中藥組成，采用標(biāo)準(zhǔn)的水煎醇沉工藝加工成含1g生藥/ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆?混合于顆粒飼料中喂養(yǎng)，大鼠日攝取劑量約為人類公斤體重的10倍。對照組大鼠繼續(xù)按原方式喂養(yǎng)。2.標(biāo)本采集和制作：實(shí)驗(yàn)滿20周稱大鼠體重，脫頸處死大鼠。大鼠處死后剖開腹腔，剪取整個

3、肝臟，記錄一般情況及肝內(nèi)癌結(jié)節(jié)數(shù)及大小，稱肝質(zhì)量，在無菌條件下分別制備正常組大鼠肝臟標(biāo)本，對照組和健脾理氣組大鼠肝臟內(nèi)癌組織(同時有多個癌結(jié)節(jié)則取其中最大者)、癌旁組織(距離癌組織3mm內(nèi)的組織)及癌遠(yuǎn)端組織(距離癌組織1cm外的組織)標(biāo)本，分別用10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切取4um厚的切片，蘇木素襯染色，熱水藍(lán)化，吹干后，樹脂封片。免疫組化法檢測大鼠肝組織中Treg細(xì)胞及CD4+T、CD8+T細(xì)胞。較好的標(biāo)本照相留存。

4、r>　　 結(jié)果：10.健脾理氣中藥干預(yù)的大鼠肝癌模型在體重下降(P=0＜0.01)和肝重增加方面(P=0.021＜0.05)均不如對照組大鼠明顯，且肝內(nèi)癌結(jié)節(jié)個數(shù)較對照組大鼠少(P=0.011＜0.05)，所形成的腫瘤較對照組大鼠小(P=0.026＜0.05)。2.通過免疫組化檢測，健脾理氣中藥組大鼠肝癌微環(huán)境中Treg細(xì)胞數(shù)量較對照組大鼠肝癌微環(huán)境中少(P=0.0072＜0.01)，CD4+T細(xì)胞數(shù)量較對照組大鼠增加(P=0＜0.0