增強口蹄疫疫苗免疫反應及其調節(jié)機制的研究.pdf

1、動物烈性傳染性疾病是威脅動物及人類生存的一類傳染病，一旦爆發(fā)將會造成災難性的后果。疫苗接種是預防此類傳染病的有效方法。傳統(tǒng)的滅活疫苗在動物傳染性疾病的防治中發(fā)揮了重要的作用，但其在制作方法和應用效果上還有不足之處。其中之一是現(xiàn)行使用的礦物油佐劑有一定的副作用和較低的細胞免疫效果。因此提高疫苗免疫效果的重要方法之一是對佐劑進行改良。左旋咪唑(LMS)最初應用于去除動物體內寄生蟲的化學藥物。許多研究證明LMS是一種良好的免疫增強劑，它能使受

2、抑制的吞噬細胞和淋巴細胞功能恢復正常，而且LMS還應用于癌癥的免疫治療上。本實驗室也證實DIS作為口蹄疫DNA疫苗的佐劑，不但產生了提高口蹄疫的體液免疫反應，更重要的是能夠刺激機體產生較強的細胞免疫反應。因此為了研究LMS作為口蹄疫滅活疫苗的佐劑效果，并進一步探討LMS作為佐劑增強免疫反應的作用機理。本研究利用不同濃度的LMS與口蹄疫滅活抗原146S混合免疫BAI-B/c和C57 BL/6小鼠，檢測產生的體液和細胞免疫水平。結果表明在免

3、疫后42天，2％的LMS誘導產生了較高水平的IgG：而0.5％的LMS刺激產生了較強的T細胞增殖反應。為進一步探討LMS作為佐劑增強免疫反應的作用機理，本研究還進一步對在LMS影響下，免疫系統(tǒng)對抗原提呈過程中起重要作用的MHC，共刺激分子，及負反饋分子SOCS1和SOCS3進行檢測。結果表明LMS可能是通過提高MHC分子和共刺激分子在抗原提呈細胞(APC)上的表達，進而提高了免疫反應水平。同時還證明礦物油佐劑造成低水平細胞免疫能力可能是

4、由于上調了負反饋分子SOCS1和SOCS3的表達，從而抑制了其細胞免疫水平。以上研究結果表明LMS可以作為滅活疫苗的佐劑增強其免疫效果。 DNA疫苗能產生體液免疫反應，尤其是能夠有產生細胞免疫反應的優(yōu)點，在許多疫苗研究中已經取得很大進步，但在大動物和人體中的免疫效力尚不理想。而傳統(tǒng)的滅活疫苗能夠誘發(fā)產生較高的抗體水平，但細胞免疫水平較弱。因此我們設想將口蹄疫DNA疫苗與蛋白疫苗混合免疫小鼠，以期利用各自優(yōu)勢免疫方案提高整體免疫水

5、平。結果出乎我們的預料，結果發(fā)現(xiàn)混合免疫小鼠產生的抗體水平很高，但T細胞增殖反應卻受到抑制，IFN-γ和IL-2表達水平也相應的降低。為進一步驗證這種免疫抑制現(xiàn)象的普遍性，本研究分別利用豬瘟病毒(CFSV)抗原和人乙肝病毒S抗原(HBsAg)為蛋白疫苗與兩種相應的DNA疫苗混合免疫，同樣產生了Th1 T細胞免疫抑制。結果表明DNA與蛋白疫苗混合免疫產生的抑制T細胞活性是一種普遍存在的的現(xiàn)象。實驗進一步證明將DNA疫苗與蛋白疫苗分開小鼠左

6、右腿注射，仍會抑制T細胞活性，表明只要DNA疫苗與蛋白疫苗同時出現(xiàn)與小鼠體內，就會產生T細胞抑制；而當DNA疫苗與非同源編碼的蛋白疫苗共同免疫時，則不會產生此種免疫抑制結果，證實這種抑制只有當DNA疫苗與其同源編碼的蛋白疫苗共同免疫才會產生，所以具有抗原特異性。 為進一步研究這種免疫抑制現(xiàn)象的產生機制，將免疫后小鼠的T細胞進行細胞過繼轉移和混合淋巴細胞反應(MLR)表明轉移后的T細胞仍然具有抑制作用，不但能在體內抑制抗原特異性的

7、細胞免疫反應，還能在體外以非抗原特異性的方式發(fā)揮抑制作用。為證明這種抑制作用與體內存在的天然Treg細胞相關性及其T細胞亞型，本研究利用純化得到CD4+，CD8+，CD4+CD25-的T細胞亞群，進行T細胞增殖反應，T細胞過繼轉移和MLR實驗。結果表明DNA疫苗與滅活疫苗聯(lián)合免疫誘導的免疫抑制現(xiàn)象是由CD4+CD25-1細胞亞群產生，它們并具有Foxp3和IFN-γ高表達特性。說明DNA疫苗與滅活疫苗聯(lián)合免疫誘導了一類新型的CD4+CD

8、25-Treg細胞。此類細胞如何發(fā)揮免疫抑制功能仍然在研究中?？偠灾?，本研究證實了LMS是一種良好的病毒滅活疫苗免疫增強劑，也為其成為滅活疫苗佐劑應用研究提供了理論依據(jù)．本研究還發(fā)現(xiàn)了DNA疫苗與滅活疫苗聯(lián)合免疫產生了T細胞免疫抑制現(xiàn)象，其抑制作用是由一群新的抗原特異性Treg細胞(CD4+CD25-T細胞)產生的。此類抗原特異性Treg細胞的發(fā)現(xiàn)為Treg細胞家族增加了新的成員，并為誘導產生Treg細胞提供了一種簡單有效的方法。為探