毛冬青總皂苷、總黃酮對(duì)大、小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、　　目的：觀察毛冬青總皂苷、總黃酮對(duì)腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的保護(hù)作用。通過研究毛冬青總皂苷、總黃酮對(duì)腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型血液流變學(xué)指標(biāo)全血黏度、腦組織中一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)含量、血清中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量以及血漿中內(nèi)皮素(ET)水平、NOS、和、NO、腦組織中 SOD、MDA、谷胱甘肽過氧化酶(GSH—Px)含量、腦組織中神經(jīng)營養(yǎng)因子 BDNF和腦組織中血管內(nèi)皮

2、細(xì)胞因子 VEGF,并觀察腦組織形態(tài)學(xué)的變化,從而探討毛冬青總皂苷、總黃酮對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及特點(diǎn)。
　　方法：小鼠腦缺血再灌注：采用阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈血流10min,恢復(fù)灌流10min,再次阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈10min方法,建立小鼠腦缺血再灌注損傷模型。手術(shù)前,金納多組、尼莫地平組與毛冬青總皂苷、總黃酮大、中、小劑量組分別給予相應(yīng)的藥物灌胃,假手術(shù)組、模型組同時(shí)給予同體積 0.1%CMC 灌胃,每天 1 次,連續(xù)給藥1

3、1d。末次給藥1h后造模,手術(shù)后再灌注24h,取腦測(cè)定小鼠腦組織中NO、NOS、ATP酶及觀察腦組織形態(tài)學(xué)變化。
　　小鼠血瘀合并腦缺血再灌注：采用阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈血流 10min,恢復(fù)灌流10min,再次阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈 10min,及造血瘀各組每天肌肉注射地塞米松(地塞米松 0.8mg/kg,連續(xù)注射 15d)造血瘀,建立小鼠血瘀合并腦缺血再灌注損傷模型。手術(shù)前金納多組、尼莫地平組,大、中、小劑量毛冬青總皂苷、總黃酮組分別

4、給予相應(yīng)的藥物灌胃,假手術(shù)組、血瘀模型組、手術(shù)模型組、血瘀加手術(shù)模型組同時(shí)給予同體積 0.1%CMC灌胃,每天1次,連續(xù)給藥16d。末次給藥1h后造模,手術(shù)后再灌注24h,取血測(cè)全血黏度,取腦測(cè)定小鼠腦組織中NO、NOS, ATP酶及腦組織形態(tài)學(xué)變化。
　　大鼠局灶腦缺血再灌注：采用線栓法阻塞左側(cè)大腦中動(dòng)脈,建立大鼠局灶腦缺血再灌注損傷模型。手術(shù)前,金納多組、尼莫地平組、毛冬青總皂苷、總黃酮大、中、小劑量組分別給予相應(yīng)的藥物灌

5、胃,假手術(shù)組、模型組同時(shí)給予同體積0.1%CMC灌胃,每天1次,連續(xù)給藥6d。于末次給藥1h后,造模。本實(shí)驗(yàn)為兩批,第一批動(dòng)物手術(shù)清醒后,評(píng)估大鼠神經(jīng)功能缺失,再灌注24h后,血漿中NO、NOS、ET及腦 TTC 染片。再灌注 24h 后,評(píng)估大鼠神經(jīng)功能缺失,測(cè)定大鼠血清中 IL-1β 和 TNF-α的含量,腦組織 SOD、MDA 及 GSH-Px 酶的含量,免疫組化觀察神經(jīng)因子( BDNF、VEGF)及光鏡觀察腦組織形態(tài)學(xué)變化,透射

6、電鏡觀察大鼠腦組織亞微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果：小鼠腦缺血再灌注損傷模型：模型復(fù)制成功,小鼠腦勻漿中 NOS的活力和NO的含量顯著或明顯升高,ATP酶活性顯著降低,減輕病理組織切片神經(jīng)細(xì)胞損傷。
　　小鼠血瘀合并腦缺血再灌注損傷模型：各個(gè)模型組模型均復(fù)制成功,血瘀、手術(shù)及血瘀加手術(shù)模型組動(dòng)物全血黏度顯著升高,手術(shù)模型組和血瘀合并腦缺血模型動(dòng)物腦組織中NOS的活力和NO的含量顯著或明顯升高,ATP酶活性顯著降低,減輕病理

7、組織切片神經(jīng)細(xì)胞損傷。
　　大鼠局灶腦缺血再灌注損傷模型：模型復(fù)制成功,明顯或顯著降低模型動(dòng)物神經(jīng)功能評(píng)分；血漿中NOS的活力、NO的含量和內(nèi)皮素含量顯著或明顯升高；血清中 IL-1β、TNF-α含量、腦組織 MDA 水平顯著或明顯升高；腦組織中 SOD水平、SGH-PX酶活力顯著或明顯降低；腦組織海馬區(qū) BDNF明顯降低；腦組織海馬區(qū)VEGF明顯升高。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：毛冬青總皂苷對(duì)小鼠腦缺血再灌注模型的作用優(yōu)于

8、毛冬青總黃酮,毛冬青總黃酮對(duì)小鼠血瘀再灌注模型及大鼠局灶性腦缺血再灌注模型作用優(yōu)于總皂苷。
　　結(jié)論：毛冬青總黃酮、總皂苷可通過改善小鼠血瘀腦缺血再灌注模型血液流變學(xué)；明顯或顯著降低NOS活力、NO水平、IL-1β、TNF-α含量及MDA水平；適度升高其 ATP 酶活性、SOD、SGH-PX 酶活力、BDNF,可明顯改善實(shí)驗(yàn)大鼠神經(jīng)功能缺失評(píng)分,減少梗死面積,明顯減輕缺血損傷,改善,大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)的病變情況,從而減輕腦組織缺