bFGF及SOX-9基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細胞組織工程修復軟骨缺損.pdf

1、本研究通過兔骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)，采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將bFGF及SOX-9基因轉(zhuǎn)染至骨髓基質(zhì)細胞中，并以聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物(PLGA)為載體在體外進行組織工程培養(yǎng)骨髓基質(zhì)細胞向成軟骨分化。然后將培養(yǎng)后的轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細胞-載體復合物植入兔關(guān)節(jié)軟骨缺損模型內(nèi)，觀察軟骨修復缺損效果及成軟骨作用。我們通過以下三部分進行研究：
　　 第一部分骨髓基質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)及鑒定
　　 目的：體外分離培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)細胞并進行鑒定，為組織

2、工程提供適宜的種子細胞。
　　 方法：抽取新西蘭白兔紅骨髓，在體外分離純化獲取骨髓基質(zhì)細胞，分別用倒置顯微鏡觀察骨髓基質(zhì)細胞的增殖分化，用HE染色光鏡下觀察對細胞進行鑒定，用MTT法描繪細胞生長曲線，并對傳代培養(yǎng)的細胞進行凍存復蘇。
　　 結(jié)果：骨髓基質(zhì)細胞在在培養(yǎng)皿中貼壁生長、增殖，經(jīng)鑒定為單核細胞；細胞生長曲線顯示在接種后前6天細胞持續(xù)旺盛生長，第8天細胞活力最高；復蘇凍存56天的細胞，培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)細胞依然生長良好，增長

3、迅速。
　　 結(jié)論：可以通過在體外分離純化骨髓基質(zhì)細胞并傳代培養(yǎng)、凍存復蘇，獲得足夠數(shù)量有多向分化潛能骨髓基質(zhì)細胞，可作為組織工程的種子細胞。
　　 第二部分 bFGF與SOX-9真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建以及骨髓基質(zhì)細胞轉(zhuǎn)染
　　 目的：探討bFGF與SOX-9基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞的方法及可行性。
　　 方法：構(gòu)建bFGF與SOX-9基因真核表達質(zhì)粒，用脂質(zhì)體法介導轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細胞，通過形態(tài)學觀察、免疫組化、

4、ELISA法、及RT-PCR方法檢測bFGF與SOX-9基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞的成功性，以及轉(zhuǎn)染后骨髓基質(zhì)干細胞的生物學特性。
　　 結(jié)果：bFGF與SOX-9基因成功轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細胞，并能持續(xù)穩(wěn)定的分泌bFGF與SOX-9蛋白，并誘導骨髓基質(zhì)細胞向成軟骨方向分化。
　　 結(jié)論：bFGF與SOX-9基因可以轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞，并能誘導骨髓基質(zhì)細胞向成軟骨方向分化。
　　 第三部分轉(zhuǎn)染后骨髓基質(zhì)細胞組織工程培養(yǎng)及修

5、復軟骨缺損的動物試驗
　　 目的：探討bFGF與SOX-9基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞后在PLGA培養(yǎng)生長的生物相容性，以及采用組織工程方法培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)細胞-PLGA復合物修復軟骨缺損動物模型的可行性。
　　 方法：將bFGF與SOX-9基因轉(zhuǎn)染成功后的骨髓基質(zhì)細胞在PLGA培養(yǎng)生長，制備軟骨缺損動物模型，將復合物植入軟骨缺損，通過大體標本觀察、組織學觀察及Ⅱ型膠原免疫組化及RT-PCR檢測對軟骨缺損模型的修復效果。