螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的切割分離法培養(yǎng).pdf

1、目的：建立一種簡(jiǎn)單而且穩(wěn)定可靠的分離鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元(spiralganglionneurons，SGNs)的培養(yǎng)方法。 方法：根據(jù)SGNs分離的方法不同分為切割分離法組(A組)、消化法組(根據(jù)消化酶的種類、酶消化的時(shí)間不同再分為B、C、D組)。A組把分離得到螺旋神經(jīng)節(jié)組織塊，剪切成相同的8-10塊后接種到已用多聚賴氨酸包被的35mm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。消化法把分離得到的螺旋神經(jīng)節(jié)組織塊移到裝有D-Hanks溶液的4ml的離心管

2、中，B組加入0.25％胰蛋白酶+0.001％DNas的消化酶溶液溶液，在37℃作用20分鐘后，加入含血清的培養(yǎng)液中止消化，1000rpm離心5分鐘，棄上清，加入含血清的培養(yǎng)基輕輕的吹打后接種培養(yǎng)，其他步驟與A組相同。C組單用含0.25％胰蛋白酶的消化酶溶液，作用20分鐘。D組，用0.25％胰蛋白酶+0.001％DNas的消化酶溶液溶液，作用30分鐘，其余操作與B組相同。倒置顯微鏡下觀察比較各組培養(yǎng)SGN細(xì)胞的活力以及生長(zhǎng)與分化過程。對(duì)S

3、GNs神經(jīng)元進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。 結(jié)果：A組培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)突起生長(zhǎng)良好，細(xì)胞存活時(shí)間1-2周。B組分離培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞總數(shù)與A組差別不顯著，神經(jīng)突起生長(zhǎng)的長(zhǎng)度比A組短。C、D組培養(yǎng)1周后，神經(jīng)細(xì)胞總數(shù)比A組少，存活時(shí)間較A組短，神經(jīng)突起生長(zhǎng)比A組短。 結(jié)論：成功建立了切割分離法分離與培養(yǎng)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的方法，與消化法相比，其操作簡(jiǎn)單，可以取得酶解組織同樣的效果，滿足體外多種實(shí)驗(yàn)的需要。 耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神

4、經(jīng)元(Spiralganglionneurons，SGNs)是聽覺系統(tǒng)的一級(jí)神經(jīng)元，在聽覺的傳到過程中起著重要作用。藥物(化療藥物)、噪聲等因素容易引起內(nèi)耳細(xì)胞——毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的損傷，毛細(xì)胞的損失還可以導(dǎo)致螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞的繼發(fā)性退行性退變。哺乳動(dòng)物的螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的再生能力非常低[1]，直接、間接的損傷導(dǎo)致永久性的聽力下降，因此，受損的SGNs的保護(hù)與修復(fù)對(duì)恢復(fù)聽力起關(guān)鍵性作用。本文對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的損傷與保護(hù)因素及