羊膜組織封閉視網(wǎng)膜裂孔研究.pdf

1、河弦匝甜六蠆臨床醫(yī)學博士專業(yè)學位論文羊膜組織封閉視網(wǎng)膜裂孔研究申請人姓名導師專業(yè)二級學院研究起止日期交稿日期郝玉華馬景學教授外科學河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院2003年9月一2005年4月2005年5月中文摘要增殖和移行，是形成脈絡膜視網(wǎng)膜粘連，封閉視網(wǎng)膜裂孔的關鍵。Koizumi等研究表明，羊膜上皮細胞和基底膜內(nèi)含有大量的生長因子如EGF、HGF、KGF、bGFG、TGFB，且某些生長因子如EGF、bFGF可促進視網(wǎng)膜膠質(zhì)細胞的增殖和移行。我

2、們采用體外培養(yǎng)兔視網(wǎng)膜MUller細胞，在培養(yǎng)過程中加入不同濃度的羊膜勻漿，觀察羊膜對體外培養(yǎng)的兔視網(wǎng)膜MUller細胞增殖能力的影響，探討羊膜用于治療孔源性視網(wǎng)膜脫離的潛在可能性。方法：1、取第四代經(jīng)免疫組化和電鏡鑒定的兔視網(wǎng)膜MUller細胞，以3104／ml密度接種于24孔板，3孔／組，培養(yǎng)24小時后，加入不同濃度羊膜勻漿(800、400、200、100ug／m1)繼續(xù)培養(yǎng)24小時，胰蛋白酶消化，細胞計數(shù)，繪制劑量效應曲線。2、取

3、第四代兔視網(wǎng)膜MUller細胞，以3104／ml接種予24孔板，3孔／組，24小時后，每孔加入羊膜勻漿(800ug／m1)條件培養(yǎng)基，孵育12、24、36、48、72、96小時后檢測，繪制時間效應曲線。3、取第四代兔視網(wǎng)膜MUller細胞以3104／ml接種于96孔板，200ul／孔，24小時后加入不同濃度羊膜勻漿條件培養(yǎng)基(800、400、200、100ug／m1)，培養(yǎng)24、48、96小時后，用MTT法檢測MUller細胞增殖率。4

4、、第四代兔視網(wǎng)膜Muller細胞以4104／ml密度接種于預置有蓋玻片的6孔板中，24小時后加入不同濃度的羊膜條件培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后，免疫組化PCNA檢測。結果：隨著條件培養(yǎng)基中羊膜勻漿濃度的增加，對兔視網(wǎng)膜MUller細胞的增殖效應逐漸增強，800ug／ml時獲得最大增殖效應，細胞增殖率為625％；在羊膜勻漿濃度恒定條件下，隨著時間延長，其對視網(wǎng)膜MUller細胞的增殖效應逐漸加強，在48小時即大到較高的增殖效應，72、96小

5、時與48小時相比無顯著差異。細胞增殖抗原檢測結果，800ug／ml組和400ug／ml組PCNA抗原陽性表達率與對照組相比具有顯著性差異。結論：羊膜對體外培養(yǎng)的兔視網(wǎng)膜Muller細胞具有促進增殖作用，且呈濃度和時間倚賴性。羊膜治療孔源性視網(wǎng)膜脫離具有潛在可能性。第三部分羊膜對兔視網(wǎng)膜MUller細胞EGFR和NGFR表達的影響目的：在腦部損傷和疾病過程中，神經(jīng)膠質(zhì)細胞可出現(xiàn)一系列的生物化學改變，如：移行、增殖及星形膠質(zhì)細胞內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)纖