二膦酸鹽在防治人工關(guān)節(jié)松動中的作用及其分子機制.pdf

1、分別從細胞水平、分子水平及動物實驗來探索二膦酸鹽在防治人工關(guān)節(jié)松動中的作用及作用機制.方法:1 細胞水平:收集小鼠骨髓細胞于含有10<'-8>mol/L的1,25二羥基維生素D<,3>[1,25-(OH)<,2>D<,3>的α-MEM完全培養(yǎng)基中體外培養(yǎng),誘導(dǎo)骨髓細胞生成破骨細胞,設(shè)置不同濃度的阿倫膦酸鈉給藥,并于培養(yǎng)的第6,9,12天觀察記錄抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,T

2、RAP)陽性多核巨細胞[破骨樣細胞(osteoclast-like cell,OLC)]生成數(shù),反映破骨細胞生成情況.記數(shù)培養(yǎng)12天骨磨片上骨吸收陷窩數(shù)及吸收面積,反映骨吸收情況.2 分子水平:分離培養(yǎng)人外周血單個核細胞,分成5組.A組:對照組,僅單核細胞.B組:關(guān)節(jié)磨屑組;培養(yǎng)細胞中加入超高分子量的聚乙烯顆粒(ultrahigh molecuar weight polyethylene,UHMWPE).C組:B+10<'-4>mol/

3、L的阿倫膦酸鈉.D組:B+10<'-5>mol/L的阿倫膦酸鈉.E組:B+10<'-6>mol/L的阿倫膦酸鈉.培養(yǎng)24小時,ELISA法檢測細胞上清中IL-1β、IL-6及TNF-α含量,提取各組細胞總RNA,用RT-PCR檢測各組骨吸收因子IL-6及TNF-α基因的表達,原位雜交方法檢測IL-1βmRNA的表達.3 動物實驗:建立人工關(guān)節(jié)松動的動物模型,設(shè)立實驗組和對照組,實驗組每日阿倫膦酸鈉灌胃,用藥8周后,對照組和實驗組組織切片