肝移植術(shù)后不同免疫狀態(tài)下CD4+CD5+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞及其CD45亞群的相關(guān)研究.pdf

1、研究目的：本研究旨在通過對肝移植患者外周血CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory T cell，Treg)及其CD45亞群在不同免疫狀態(tài)下的表達、變化及影響因素的研究，深入探討CD4+CD25+Foxp3+Treg在肝移植免疫耐受中的作用機制。
　　研究內(nèi)容：以肝移植患者為研究對象，觀察CD4+CD25+Foxp3+Treg及其CD45亞群在外周血中的變化；以外周血CD4+T淋巴細胞ATP含量評估肝移植患

2、者免疫狀態(tài)；探討不同免疫狀態(tài)下Treg在肝移植患者中的表達。
　　研究方法：第一部分：隨機選取肝移植術(shù)后6個月以上、臨床狀態(tài)穩(wěn)定的患者91例，作為肝移植術(shù)后組；選取終末期肝病、在觀察期內(nèi)行肝移植術(shù)患者23例，作為手術(shù)對照組，分別在肝移植術(shù)前、術(shù)后1個月、3個月、6個月時行Treg檢測。所有標本在熒光抗體染色后，以流式細胞儀檢測CD4+CD25+Foxp3+Treg及其CD45RA、CD45RO、CD31分子的表達，分析年齡、術(shù)后時

3、間、免疫抑制劑類型及濃度、肝移植術(shù)等因素對CD4+CD25+Foxp3+Treg的影響。第二部分：隨機選取肝移植術(shù)后患者189例，利用ImmuKnow方法檢測患者外周血CD4+T淋巴細胞ATP水平，分析性別、年齡、術(shù)后時間、排斥反應(yīng)、感染等因素對其影響。根據(jù)CD4+T淋巴細胞ATP水平分為低免疫應(yīng)答組(<225 ng/mL)、正常免疫應(yīng)答組(225-525ng/mL)和高免疫應(yīng)答組(>525 ng/mL)，比較各組間排斥反應(yīng)和感染的發(fā)生

4、率。第三部分：以肝移植術(shù)后6個月以上、服用他克莫司(FK506)的肝移植患者為研究對象，按臨床狀態(tài)將所有患者分為感染組、排斥組和穩(wěn)定組，比較各組間CD4+CD25+Foxp3+Treg比例及數(shù)量的差異。比較低免疫應(yīng)答組、正常免疫應(yīng)答組和高免疫應(yīng)答組三組間CD4+CD25+Foxp3+Treg比例及數(shù)量的差異，并分析其與CD4+T淋巴細胞內(nèi)ATP的相關(guān)性。
　　研究結(jié)果：第一部分：肝移植術(shù)后患者CD4+CD25+Foxp3+Treg

5、的數(shù)量顯著低于健康對照組(2.79×107/L±2.02×107/L VS4.29×107/L±2.40×107/L，P=0.005)。免疫抑制劑的類型和濃度對其影響明顯。雷帕霉素(Rapa)組中CD4+CD25+Foxp3+Treg比例為10.36％±2.52％，明顯高于FK506組(6.97％±3.28％，P=0.004)與健康對照組(6.66％±2.41％，P=0.005)。以FK506谷值濃度7.0 ng/mL為標準，將其分為高

6、濃度組與低濃度組，低濃度組中CD4+CD25+Foxp3+Treg比例為7.56％±3.31％，明顯高于高濃度組的4.84％±2.11％(P=0.001)。CD4+CD25+Foxp3+Treg比例在肝移植后逐步下降(P=0.003)，肝移植術(shù)前(10.99%±5.49％)高于術(shù)后1個月(7.59%±4.20％)、3個月(6.26％±2.98％)和6個月(5.65%±2.97％)，亦明顯高于健康對照組(6.66%±2.41％)(P值均小

7、于0.05)。CD4+CD25+Foxp3+Treg中激活型CD45RO+Treg比例顯著高于初始型CD45RA+Treg(71.77%±14.66％ VS14.64%±11.08％，P=0.000)，但二者表達CD31的比例無差異(P=0.517)。CD45RA+Treg表達Foxp3的比例為77.04%±20.69％，高于CD45RO+Treg的70.77%±19.08％(P=0.002)，并且CD45RO+Treg的比例與患者年齡

8、正相關(guān)(r=0.526，P=0.000)，而CD45RA+Treg與年齡負相關(guān)(r=-0.325，P=0.003)。第二部分：共對189例患者進行290例次外周血CD4+T淋巴細胞ATP檢測，低免疫應(yīng)答組、正常免疫應(yīng)答組和高免疫應(yīng)答組排斥反應(yīng)發(fā)生率分別為0.9％、3.4％和15.8％，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.021)；感染發(fā)生率分別為20.7％、13.7％和5.3％，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.000)。第三部分：不同臨床狀態(tài)下，CD4+C

9、D25+Foxp3+Treg在CD4+T細胞中的比例存在差異(P=0.010)，排斥組比例(4.38％±1.22％)分別低于穩(wěn)定組(6.97%±3.28％，P=0.029)與感染組(9.16%±4.12％，P=0.001)，但與健康對照組(6.66%±2.41％)比較則無差異存在(P=0.088)，感染組中Treg比例分別高于排斥組、穩(wěn)定組和健康對照組(P值分別為0.001、0.022和0.028)。無論是細胞比例，還是外周血中的絕對數(shù)

10、量CD4+CD25+Foxp3+Treg在低免疫應(yīng)答組、正常免疫應(yīng)答組和高免疫應(yīng)答組中的比較均無差異(P=0.355和P=0.342)。CD4+CD25+Foxp3+Treg比例與CD4+T淋巴細胞內(nèi)ATP值亦無直線相關(guān)關(guān)系(r=-0.130，P=0.188)。
　　研究結(jié)論：(1)肝移植患者術(shù)前的CD4+CD25+Foxp3+Treg水平高于健康對照組，在術(shù)后呈下降趨勢。CD4+CD25+Foxp3+Treg比例與免疫抑制劑類型

11、有關(guān)，Rapa能夠促進Treg比例增加，而FK506抑制Treg比例增加，并且與FK506的濃度有關(guān)。激活型CD45RO+Treg的比例高于初始型CD45RA+Treg，前者與患者年齡呈正相關(guān)，后者與年齡呈負相關(guān)。但初始型CD45RA+Treg表達Foxp3的比例高于激活型CD45RO+Treg。(2)肝移植術(shù)后患者外周血CD4+T淋巴細胞ATP能夠較為準確的反映肝移植術(shù)后患者免疫狀態(tài)。低免疫應(yīng)答組感染發(fā)生率明顯升高，高免疫應(yīng)答組排斥反