改良ALT和AST參考方法的建立、評價及應用.pdf

1、1.研究意義與目的 檢驗結果的互認是當前臨床實驗室質量管理中的研究熱點之一。互認的基礎是檢驗結果具有可比性，而檢測結果只有直接或間接地溯源到參考方法和或參考物質，才能保證檢驗結果的準確性和不同實驗室檢測結果具有可比性。ALT和AST是臨床實驗室血清酶學測定中非常重要的常規(guī)項目，其測定的準確性直接影響到肝臟疾病的診斷、治療和預后。目前國內臨床實驗室血清酶測定大多采用非配套檢測系統(tǒng)，即大多采用進口儀器和校準品，但試劑為國產試劑，或改

2、變配套檢測系統(tǒng)的檢驗程序，致使校準品喪失溯源性，導致不同檢測系統(tǒng)或方法的檢驗結果存在較大差異，缺乏可比性。而且國產ALT和AST試劑幾乎全是不含磷酸吡哆醛的，而IFCC公布的37℃條件下ALT和AST的參考方法中是含有磷酸吡哆醛的。鑒于此，本研究將參照IFCC推薦的參考方法，建立不含磷酸吡哆醛的改良ALT和AST參考方法，并對初步建立的改良ALT和AST參考方法進行方法學性能評價，了解其各項性能指標。同時用建立的改良ALT和AST參考方

3、法對制備的酶校準品進行賦值，然后用賦值的酶校準品校準各實驗室開放系統(tǒng)，評價校準前后各系統(tǒng)與參考方法間測定結果的偏倚，同時了解不同實驗室間ALT和AST測定結果的可比性以及非新鮮血清樣本的基質效應。 2.方法 參照IFCC公布的37℃條件下ALT和AST一級參考測量程序相關文件，建立本研究不含磷酸吡哆醛的改良ALT和AST參考方法。根據(jù)美國國家實驗室標準化協(xié)會（CLSI）系列文件（EP5-A2、EP15-A、EP6-A）對

4、建立的改良參考方法的精密度、正確度、線性范圍等性能進行評價。使用初步建立的改良ALT和AST參考方法對新鮮血清進行定值，用此定值的新鮮血清作為校準品校準廣州地區(qū)10家實驗室的常規(guī)檢測系統(tǒng)。用改良參考方法和常規(guī)檢測系統(tǒng)同時檢測7份能力驗證盲樣、4份市售制備物和5份新鮮血清，比較校準前后測定結果間的偏倚，比較常規(guī)方法與參考方法間基于不同基質（人血清與質控血清）的偏倚差異，進行檢驗結果的可比性和基質效應的評價。 3.結果 紫外

5、分光光度計、分析天平、pH計、電子溫度計、移液器和容量瓶均檢定合格，不確定度符合方法要求。溫控器顯示為37．2℃時，比色杯內溶液溫度最接近37℃；比色杯內溶液180秒后可達到設定溫度；移液器加樣模式實驗顯示吸一檔打兩檔，打時靠壁為精密度最佳的加樣模式。改良ALT和AST參考方法的批內不精密度均<1％，總不精密度均<2％，符合精密度性能要求；檢測日本臨床化學會酶參考品結果均在其不確定度允許范圍內，cfas各濃度測定結果與靶值基本一致，參加

6、參考實驗室網(wǎng)絡賦值計劃測定結果與均值比較在等效限內。改良ALT和AST參考方法分析測量范圍上限分別為335．8U/L和363．6U/L。校準前ALT和AST新鮮血清測定結果與參考方法測定結果之間偏倚大于20％的所有11個測定結果中，有10個測定結果來源于用理論K值計算酶活性的檢測系統(tǒng)；校準前新鮮血清組ALT和AST的最大偏倚分別為-29．2％和-25．0％，平均偏倚分別為10．7％和9．3％；使用改良參考方法定值的酶校準品校準后，最大偏

7、倚分別降為15．2％和12．3％，平均偏倚分別降為3．4％和2．1％。ALT結果中1種能力驗證盲樣對所有檢測系統(tǒng)都表現(xiàn)基質效應，AST結果中2種能力驗證盲樣對所有檢測系統(tǒng)無基質效應，其他樣品視系統(tǒng)的不同而表現(xiàn)出不同的情況。 4.結論 改良ALT和AST參考方法已基本建立。精密度、準確度及線性范圍等性能指標均符合方法要求。應用本改良參考方法定值的新鮮血清作為校準品進行校準是實現(xiàn)不同檢測系統(tǒng)檢驗結果一致性和可比性的有效途徑，