NSE、S100 mRNA和蛋白水平與中醫(yī)藥治療急性腦出血最佳臨界出血量相關性的實驗研究.pdf

1、目的: 任繼學教授主持的“八五”攻關項目《中醫(yī)藥治療急性出血性中風的實驗與臨床研究》已經(jīng)證實，在出血量<50ml，排除腦干、小腦出血的情況下，中醫(yī)藥治療急性腦出血較西醫(yī)常規(guī)治療療效顯著。因此初步確定中醫(yī)藥治療急性腦出血的臨界出血量為<50ml，但50ml以下不同出血量之間中醫(yī)藥療效的有效率和顯效率差異較大。本課題即是在此基礎上，通過測定不同出血量的NSE、S100含量變化，探討其與出血量、腦組織損傷情況的關系，以期能夠初步確定中醫(yī)藥治療

2、腦出血急性期的最佳出血量，初步確立能夠輔助診斷腦出血的臨床新指標，為最佳中醫(yī)內(nèi)科保守診治標準的確立奠定基礎。 方法：建立大鼠腦出血模型，通過對腦出血模型大鼠中藥干預與否的不同來進行以下幾個方面的觀察：（1）大鼠神經(jīng)功能缺損評分，觀測大鼠神經(jīng)功能改變。（2）NSE和S100血清值通過ELISA檢測；（3）免疫組化ABC法檢測NSE和S100在腦組織的陽性表達，陽性細胞染色呈棕黃色；（4）運用RT-PCR檢測NSE和S100各自mR

3、NA在腦組織的表達。 結(jié)果：（1）術后1天，模型組，給藥組在各出血量情況下神經(jīng)功能缺損評分比較沒有差別（P>0.05），但均高于假手術組，有明顯差異（P<0.01）。給藥組與模型組在不同出血量情況下，神經(jīng)功能缺損評分隨出血量的增多而呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢。術后3天，給藥組各出血量組評分均少于模型組（P<0.05）。（2）術后3天大鼠血清NSE水平，模型組高于假手術組，給藥組療效均好于模型組，特別是27ul（P<0.01）和40ul（

4、P<0.01）。給藥組的27ul和40ul出血量組血清NSE水平明顯降低，與模型組相比有統(tǒng)計學意義；模型組內(nèi)比較，血清NSE水平27ul與40ul、53ul、67ul比較均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,40ul、53ul和67ul之間比較無顯著差別（P>0.05）；術后3天大鼠血清S100水平，模型組高于假手術組，給藥組（53ul、67ul）高于假手術組，有統(tǒng)計學意義。給藥組療效均好于模型組，特別是27ul和40ul組（P<0.01）。

5、模型組內(nèi)比較，血清S100水平27ul與40ul、53ul、67ul比較均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）,40ul、53ul和67ul之間比較無顯著差別（P>0.05）。給藥組的27ul和40ul出血量組血清S100水平明顯降低。（3）血清NSE和S100的ROC曲線分析提示將血清NSE作為反映腦出血腦損傷達到不可逆程度的診斷界值初步定為19.95ng/ml至21.65ng/ml；血清S100作為腦出血后腦損傷達到不可逆程度的診斷界值初步

6、定為6.3ng/ml至8.16ng/ml；NSE和S100曲線下面積比較無差異。（4）腦出血后血腫周圍細胞病理形態(tài)發(fā)生了病變，表現(xiàn)為出血的損傷修復過程，出血灶周圍存在腦缺血改變。中藥干預對出血灶周圍組織有治療作用，能明顯的加速血腫吸收、減輕水腫，促進毛細血管、膠質(zhì)細胞和膠原纖維增生，減輕缺血性損害。（5）NSE蛋白免疫組化結(jié)果提示給藥組較模型組在各個出血量情況下，免疫反應均減弱；以小量出血組（27ul、40ul）更為明顯。腦組織NSE表

7、達的灰度值，模型組平均灰度值與假手術組比較有顯著差異（P<0.05-0.01）；給藥組與模型組平均灰度值比較均有顯著性差異（P<0.05-0.01）。S100蛋白的免疫組化結(jié)果提示治療組各個出血量組的染色均深于假手術組，與對照組相比，有所變淺，以小量出血組（27ul、40ul）更為明顯。腦組織S100表達的灰度值，模型組平均灰度值與假手術組比較有顯著差異（P<0.01）；給藥組與模型組平均灰度值比較均有顯著性差異（P<0.05-0.01

8、）。（6）S100 mRNA的測定結(jié)果顯示S100擴增產(chǎn)物片段與預期長度相符，腦出血后模型組S100 mRNA的表達較假手術組明顯升高（P<0.01），給藥組S100 mRNA的表達與假手術組相比無差別。給藥組和模型組對比，S100 mRNA的表達均有所降低，有統(tǒng)計學意義。模型組內(nèi)比較，27ul和40ulS100 mRNA的表達無差別，均低于53ul和67ul，53ul與67ul組S100 mRNA的表達無差別。 結(jié)論:（1）本

9、實驗所選用的動物模型，操作簡單，重復性好，能夠應用該模型進行課題的研究。以前囟為0點，前囟前0.4mm，中線旁開3mm，顱骨表面下6mm的定位點造成的神經(jīng)功能缺損最明顯，血腫形態(tài)及位置最接近基底節(jié)，未發(fā)生破入腦室的情況，能夠做為實驗研究的最佳定位點。（2）中藥干預能明顯改善腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀；血清NSE、S100水平能夠作為反映腦出血后腦損傷程度的敏感指標。（3）中藥干預能夠調(diào)控腦出血大鼠血清NSE、S100水平；初步揭示中醫(yī)藥

10、治療腦出血在40ul（人腦30ml）以內(nèi)是安全，有效的。（4）血清NSE做為腦出血后腦損傷達到不可逆程度的診斷界值初步定為19.95ng/ml-21.65ng/ml；血清S100腦出血后腦損傷達到不可逆程度的診斷界值初步定為6.3ng/ml-8.16ng/ml。（5）中藥干預能明顯改善腦出血大鼠局部的組織病理學改變，免疫組化證實中藥干預能明顯減輕腦組織損傷，腦組織NSE、S100灰度值的變化隨出血量的增加呈逐漸上升趨勢，但是達到一個臨界

11、值后，就不再上升，反映在腦出血達到一定程度的時候，有一個臨床腦損傷的臨界點。中藥干預能調(diào)節(jié)S100 mRNA的表達，同時，隨著出血量的增加而逐漸升高，但是達到一個峰值之后，就不再上升，此峰值在40ul和53ul之間，與免疫組化的結(jié)果相符合。（6）NSE在腦組織的表達很微弱或是不表達，結(jié)合免疫組化結(jié)果推斷，腦出血后NSE蛋白在損傷局部的升高是由于腦出血后多種原因?qū)е律窠?jīng)元細胞死亡，NSE蛋白的滲漏所致；從而進一步推斷NSE比S100更能直