精氨酸及視黃酸對(duì)大鼠垂體生長(zhǎng)調(diào)控相關(guān)miRNAs表達(dá)的影響.pdf

1、視黃酸是維生素A的活性代謝產(chǎn)物，在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。MicroRNAs(miRNAs)作為機(jī)體內(nèi)重要調(diào)控物質(zhì)，在性激素、生長(zhǎng)激素等垂體激素分泌調(diào)節(jié)上亦扮演重要角色，但視黃酸作為小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是否對(duì)垂體miRNAs的表達(dá)產(chǎn)生影響以及是否通過(guò)miRNAs途徑影響垂體生長(zhǎng)激素仍沒(méi)有相關(guān)報(bào)道。本研究旨在探索視黃酸對(duì)大鼠垂體中生長(zhǎng)調(diào)控相關(guān) miRNAs的影響，以期發(fā)現(xiàn)視黃酸通過(guò)miRNAs調(diào)控垂體生長(zhǎng)激素的新機(jī)制。
　　本

2、實(shí)驗(yàn)首先選擇大鼠垂體瘤細(xì)胞（GH3細(xì)胞）為研究對(duì)象，篩選對(duì)垂體生長(zhǎng)激素有作用的小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；分別用不同濃度精氨酸（50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L和800μmol/L）和不同濃度視黃酸（0.1μmol/L,1μmol/L和10μmol/L）處理 GH3細(xì)胞，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR，檢測(cè)其對(duì)垂體生長(zhǎng)調(diào)控相關(guān) miRNAs（miR-141-3p、miR-7a-5p、miR-375-3p和miR

3、-709）以及GH等基因表達(dá)的影響；然后以4周齡雄性SD大鼠為動(dòng)物模型，連續(xù)飼喂視黃酸五周，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miRNAs和GH等基因表達(dá)情況；最后構(gòu)建miR-141-3p的靶基因SOCS7以及miR-7a-5p的潛在靶基因MKNK2的真核過(guò)表達(dá)載體，初步研究其在GH3細(xì)胞上的功能。
　　本研究得到如下結(jié)果：
　　1．不同濃度的精氨酸處理GH3細(xì)胞24 h后，在800μmol/L時(shí)，miR-375-3p的表達(dá)顯著性提高，

4、在400μmol/L時(shí)，miR-7a-5p與miR-709表達(dá)量顯著性提高。同時(shí)在200μmol/L時(shí)，精氨酸可以促進(jìn)GH1和PIT1的mRNA表達(dá)。
　　2.不同濃度的視黃酸處理GH3細(xì)胞36 h后，在1μmol/L時(shí)，視黃酸顯著抑制miR-7a-5p、miR-375-3p以及miR-709的表達(dá)，但顯著促進(jìn)GH1和PIT1基因的mRNA表達(dá)。在0.1μmol/L時(shí)，視黃酸顯著抑制miR-141-3p的表達(dá)。
　　3.視黃

5、酸飼喂大鼠后，血清 IGF-1含量顯著上升，miR-141-3p、miR-7a-5p、miR-375-3p和miR-709的mRNA表達(dá)受抑制，但對(duì)GH1和PIT1 mRNA表達(dá)均有一定的促進(jìn)作用。
　　4.成功構(gòu)建了pcDNA3.1-SOCS7、pcDNA3.1-MKNK2和pcDNA3.1-ABHD8真核過(guò)表達(dá)載體，并初步發(fā)現(xiàn)SOCS7和MKNK2這兩個(gè)基因在GH3細(xì)胞中對(duì)GH1和PIT1具有促進(jìn)作用。
　　而視黃酸可以