一、抗結(jié)腸癌中草藥活性成分的分離純化及其作用機(jī)理的研究;二、線蟲Haemonchus contortus脂肪酸結(jié)合蛋白的研究.pdf

1、華東師范大學(xué)博士學(xué)位論文一、抗結(jié)腸癌中草藥活性成分的分離純化及其作用機(jī)理的研究;二、線蟲Haemonchus contortus脂肪酸結(jié)合蛋白的研究姓名：曠麗莎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：錢旻20090401華東師范大學(xué)博士學(xué)位論文 論文摘要柘木為桑科構(gòu)棘屬( C u d r a n i a l r i c u s p i d a t a ( C a r t ．) B u r ) 植物，廣泛分布于我國(guó)各地。柘木的干燥根及木

2、材在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中主要有清熱涼血，舒筋活絡(luò)的作用。除了傳統(tǒng)的應(yīng)用領(lǐng)域外，近代民間開始將柘木用于消化道腫瘤治療。例如，浙江民間流傳用柘木根水煎液來治療癌癥：上世紀(jì)7 0 年代柘木被制成糖漿和注射劑用于臨床治療晚期消化道腫瘤，結(jié)果顯示其能顯著減輕化療藥物對(duì)免疫功能的抑制和損害從而降低化療的毒副作用。另外，柘木也是已申請(qǐng)專利的抗癌中成藥“生命之星“ 中的主要藥材之一。臨床試驗(yàn)證明，柘木對(duì)各種癌癥均有較好的療效并且毒副作用較小。柘木全株中含有黃酮類

3、、生物堿及雜蛋白、鞣質(zhì)、多糖等多種成分。隨著柘木在腫瘤治療上應(yīng)用的擴(kuò)大，近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者開始投身于柘木化學(xué)成分與其藥理研究中，并取得了一定進(jìn)展。I s o a l v a x a n t h o n e ( I A X ) 和C u d r a t r i c u s x a n t h o n e G ( C T X G ) 是從柘木中分離得到的兩個(gè)結(jié)構(gòu)新穎的( 口山)酮類化合物。前期工作表明，I A X 和C T X G 顯示出明顯

4、的抑制消化道癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。本實(shí)驗(yàn)在前期工作的基礎(chǔ)上對(duì)柘木的活性成分I A X 和C T X G 進(jìn)行了抗結(jié)腸癌活性的鑒定并對(duì)它們的作用機(jī)理進(jìn)行了研究。本論文主要分成以下幾個(gè)部分：一、水線草化學(xué)成分的分離、純化與結(jié)構(gòu)鑒定首先，我們采用正、反相柱層析的方法在抗結(jié)腸癌活性的指導(dǎo)下對(duì)水線草中的化學(xué)成分進(jìn)行了分析、分離及純化，得到活性單體化合物。其次，利用核磁共振及各種波譜方法對(duì)分離所得的單體化合物進(jìn)行了化學(xué)結(jié)構(gòu)的鑒定，共得到了2 3 個(gè)化合

5、物，包括3 個(gè)新的環(huán)烯醚萜苷類化合物和2 0 個(gè)已知化合物，為進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。二、水線草抗結(jié)腸癌活性成分的鑒定及作用機(jī)理首先，通過多種活性鑒定的方法分別檢測(cè)了不同分離階段的水線草提取物對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的存活率、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞周期分布等多方面的影響，評(píng)估了各樣品的體外抗結(jié)腸癌活性，為活性成分的分離提供了方向。其次，對(duì)最后分離得到的2 3 個(gè)單體化合物進(jìn)行了活性鑒定，發(fā)現(xiàn)其中有4 個(gè)化合物具有顯著的抗結(jié)腸癌活性。它們是槲皮素、香豆素化合物

6、H e d y o t i s c o n eA 、3 - 谷甾醇和丁香酸，I C 5 0分別為1 0 4 ．3 I - t g ／m l 、1 5 4 ．2 1 x g ／m l 、1 0 4 ．5 p ．g ／m l 、11 2 ．9 p ．g ／m l 。其中，香豆素化合物H e d y o t i s c o n e A 雖為已知化合物，但尚未有過關(guān)于其生物活性的報(bào)道。我們分別對(duì)這四種化合物的抗結(jié)腸癌機(jī)理進(jìn)行了初步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)

7、它們均能誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡。其中，經(jīng)H e d y o t i s c o n e A 處理過的結(jié)腸癌細(xì)胞H C T - 8 及R K O 的細(xì)胞周期被阻斷，并出現(xiàn)細(xì)胞核染色質(zhì)皺縮等明顯的凋亡特征，說明H e d y o t i s c o n e A可能通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用來發(fā)揮抗結(jié)腸癌活性。同時(shí)，半定量P C R 實(shí)驗(yàn)揭示H e d y o t i s c o n e A 可以抑制H C T - 8 細(xì)胞中b a x 基因的表達(dá)，