電離輻射對(duì)小鼠小腸絨毛上皮細(xì)胞和固有層纖維細(xì)胞作用的基因表達(dá)譜研究.pdf

1、背景：早前在研究C60(OH)24-SLN-E的對(duì)小鼠輻射防護(hù)作用研究時(shí)，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)6 Gy60Co射線照后21天的小鼠小腸固有層細(xì)胞中的γ-H2AX foci數(shù)量遠(yuǎn)多于小腸絨毛上皮細(xì)胞，這一現(xiàn)象提示兩種細(xì)胞在DNA修復(fù)能力上存在差異。
　　目的：探索小腸絨毛上皮細(xì)胞和固有層細(xì)胞在DNA損傷修復(fù)能力產(chǎn)生差異的分子機(jī)制，尋找治療腸型放射病的關(guān)鍵靶分子。
　　方法：⑴小鼠小腸絨毛上皮細(xì)胞和固有層纖維細(xì)胞在體外進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代。再

2、將每種細(xì)胞各分為兩組，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞經(jīng)過(guò)6Gy X線照射并修復(fù)6小時(shí)；對(duì)照組不照射。⑵細(xì)胞照射后6小時(shí)，用western blot檢測(cè)分析γ-H2AX的蛋白表達(dá)水平。⑶細(xì)胞照射后6小時(shí)，提取每個(gè)樣品的總RNA，合成標(biāo)記探針cDNA并與基因芯片進(jìn)行雜交，通過(guò)芯片掃描獲得基因表達(dá)數(shù)據(jù)并進(jìn)行差異基因篩選，進(jìn)一步對(duì)差異基因進(jìn)行GO分析和PATHWAY分析。
　　結(jié)果：①成功培養(yǎng)并獲得原代小腸絨毛上皮細(xì)胞和固有層纖維細(xì)胞。②X射線照射并修復(fù)6小

3、時(shí)后，小鼠小腸絨毛上皮細(xì)胞和固有層纖維細(xì)胞的γ-H2AX蛋白表達(dá)量都上升，但兩者之間沒(méi)有顯著的差別。③在參與DSB非同源末端連接和同源重組修復(fù)的基因表達(dá)中，兩種細(xì)胞有9個(gè)基因存在表達(dá)差異，包括POLM、XRCC5、FEN1、XRCC2、POLD3、POLD2、EME1、RAD54B和 BRCA2基因，且在小腸絨毛上皮細(xì)胞的表達(dá)都顯著高于固有層纖維細(xì)胞。照射后6小時(shí)，固有層纖維細(xì)胞中RAD54B表達(dá)明顯下調(diào)；除上述9個(gè)基因存在差異表達(dá)外，

4、RAD51和 RPA2也有差異表達(dá)，同樣在小腸絨毛上皮細(xì)胞的表達(dá)都顯著高于固有層纖維細(xì)胞。除此之外，受照后的兩種細(xì)胞中，參與細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控的部分基因也有表達(dá)差異。
　　結(jié)論：成功獲得了原代培養(yǎng)的小鼠小腸絨毛上皮細(xì)胞和固有層纖維細(xì)胞并用于基因表達(dá)差異的研究。研究發(fā)現(xiàn)，由于參與DNA非同源末端連接和同源重組修復(fù)相關(guān)蛋白明顯高表達(dá)，受照小鼠小腸絨毛上皮細(xì)胞DNA雙鏈斷裂修復(fù)能力明顯強(qiáng)于固有層纖維細(xì)胞，其中RAD54B基因的下調(diào)表