中藥復方對胃粘膜細胞癌變的抑制與逆轉作用研究.pdf

1、胃癌發(fā)生發(fā)展的過程很少直接從胃粘膜上皮產(chǎn)生，而是由多基因異常引起的漸進性的變化，在癌變前多數(shù)經(jīng)歷了較長的演變，即由正常胃粘膜轉變成為癌前病變，部分發(fā)展成胃癌。胃黏膜的腸上皮化生及不典型型增生主要存在于慢性萎縮性胃炎，雖然不典型型增生是公認的癌前病變，有發(fā)展成腫瘤細胞的潛在趨勢，但是癌前病變是一個多步驟、多因素的復雜過程，不是所有的癌前病變都會發(fā)展成為胃癌，有的可以在進程中停止發(fā)展，甚至發(fā)生逆轉或消失。此中藥復方由雪膽、老龍皮、白術、半枝

2、蓮、海螵蛸、黃芪組成。全方針對性強，配伍嚴謹，符合中醫(yī)藥的“未病先防”思想，對胃癌癌前病變的預防和治療有非常重要意義。
　　 本文利用亞硝胺類化合物成功誘導出了胃癌癌前病變的細胞模型，并進行了癌變相關蛋白的檢測，借助免疫印跡，實時熒光定量RT-PCR等生物學檢測方法評價了中藥復方對癌前病變的細胞株以及惡性程度較高的細胞株中相關分子的影響，初步探究了其抑制和逆轉胃黏膜細胞癌變的作用。
　　 一、亞硝胺類化合物MNNG誘導G

3、ES-1細胞模型的建立
　　 使用與胃癌相關的亞硝胺類化合物N-甲基-N'硝基N-亞硝基胍(MNNG)對永生化的人胃粘膜上皮細胞系GES-1進行惡性轉化實驗，得到轉化后細胞，稱為MC細胞。比較觀察GES-1細胞和MC細胞的形態(tài)，檢測癌變相關蛋白N-cadherin，P-STAT3的表達。經(jīng)MNNG處理后的GES-1細胞（命名為MC），細胞的形態(tài)以及生長特性均發(fā)生了改變。隨傳代的延續(xù)，細胞呈現(xiàn)典型的“島樣”克隆生長。癌變相關蛋白N

4、-cadherin，P-STAT3的表達量增加。
　　 二、中藥復方對MNNG誘導GES-1細胞惡性轉化的抑制作用
　　 SRB法檢測中藥復方對GES-1細胞的細胞毒作用，免疫印跡檢測中藥復方對MNNG誘導的GES-1細胞中癌變相關蛋白E-cadherin、N-cadherin、P-STAT3表達的影響，實時熒光定量RT-PCR檢測中藥復方對MNNG誘導的GES-1細胞中Snail，Twist基因的影響。SRB法檢測結果

5、顯示，中藥復方對GES-1細胞有一定的生長抑制作用，說明中藥復方在體外具有一定的抗腫瘤細胞增殖的活性，從中選出合適的給藥濃度。進一步研究發(fā)現(xiàn)中藥復方下調MNNG誘導的GES-1細胞中癌變相關蛋白N-cadherin，P-STAT3表達的影響，上調了E-cadherin的表達。實時熒光定量RT-PCR分析中藥復方對MNNG誘導的GES-1細胞Snail，Twist的mRNA表達產(chǎn)生了一定的抑制作用。
　　 三、中藥復方對MGC-8

6、03細胞惡性程度的逆轉作用
　　 MTT法檢測中藥復方對MGC-803細胞的細胞毒作用，劃痕法檢測中藥復方對MGC-803細胞遷移的影響，Transwell侵襲實驗檢測中藥復方對MGC-803細胞侵襲力的影響，克隆形成實驗檢測中藥復方對MGC-803細胞克隆形成能力的影響，軟瓊脂實驗檢測中藥復方對MGC-803細胞非錨著依賴性生長的影響，免疫印跡檢測中藥復方對MGC-803細胞中癌變相關蛋白N-cadherin，P-STAT3表

7、達的影響，實時熒光定量RT-PCR檢測中藥復方對MGC-803細胞中Snail，Twist基因的影響。MTT法檢測結果顯示，中藥復方對MGC-803細胞有一定的生長抑制作用，說明中藥復方在體外具有一定的抗腫瘤細胞增殖活性，從中選出合適的給藥濃度。劃痕實驗，Transwell侵襲實驗，克隆形成實驗，軟瓊脂實驗表明中藥復方對MGC-803細胞遷移、侵襲、克隆形成以及非錨著依賴性生長都產(chǎn)生了較好的抑制作用，進一步研究發(fā)現(xiàn)中藥復方下調了MGC-

8、803細胞中癌變相關蛋白N-cadherin，P-STAT3表達。實時熒光定量RT-PCR分析，中藥復方對MGC-803細胞Snail，Twist的mRNA表達產(chǎn)生了一定的抑制作用。
　　 本論文綜合利用現(xiàn)代藥理學和分子生物學檢測方法，成功建立了MNNG誘導的GES-1細胞模型。初步探討了中藥復方對于胃癌癌前細胞株以及惡性程度較高的癌細胞株的作用，揭示了此中藥復方對胃黏膜細胞癌變的抑制與逆轉作用，為此復方合理開發(fā)利用提供了科學的