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文檔簡介
1、傳染性支氣管炎(Infectious Bronchitis,IB)是由傳染性支氣管炎病毒引起的一種常見的傳染病。該病毒具有囊膜結(jié)構(gòu),且對溫度敏感,該特性為研制傳染性支氣管活炎疫苗耐熱保護劑研究增加了難度。由于溫度容易影響該病毒的活性,導(dǎo)致凍干后疫苗產(chǎn)品的病毒效價損失較高,使得傳染性支氣管炎凍干苗的貯存面臨挑戰(zhàn),這也是目前國內(nèi)生物制品行業(yè)的一個普遍性難題。國內(nèi)常規(guī)的凍干苗必須保存在-15℃以下,且保存期偏短,而國外的凍干苗產(chǎn)品在2~8℃可
2、保存兩年以上。為降低疫苗效價的損失、提高疫苗質(zhì)量、延長保存期、解決冷鏈運輸?shù)葐栴},本文旨在研制雞傳染性支氣管炎病毒H120株耐熱保護劑。
本文的研究內(nèi)容分為三部分,即耐熱保護劑成分的篩選以及凍干曲線參數(shù)的調(diào)試、耐熱保護劑的耐老化實驗、耐熱保護劑凍干疫苗的實驗。
在耐熱保護劑成分篩選的實驗中,共嘗試了8組不同的配方,編號從A到H,其中C組又分為C1~C6,D組分為D1、D2。分組凍干后,通過比較產(chǎn)品凍型、溶解度、殘留水
3、分含量、效價損失,最終篩選出效果最好的E組作為耐熱保護劑,其主要成分為多聚蛋白胨和海藻糖。凍干曲線的調(diào)試對凍干疫苗的質(zhì)量也是至關(guān)重要的,必須確保每組耐熱保護劑都對應(yīng)一條合適的凍干曲線。首先對不同的耐熱保護劑配制的疫苗進行少量凍干,依據(jù)凍干后產(chǎn)品的形態(tài),改變凍干曲線的參數(shù),如預(yù)凍的最低溫度、升華干燥的溫度及真空度等。最終確保當(dāng)批量疫苗凍干時,產(chǎn)品的形態(tài)一致且美觀,方可將此次調(diào)試的凍干曲線作為標(biāo)準(zhǔn)。調(diào)試的凍干曲線(E組)參數(shù)如下:預(yù)凍的最低
4、溫度為-45℃,升華干燥的真空度為0.08mbar,升華溫度為-15℃,解析干燥溫度為26℃,總凍程約43 h。
將E組制成的疫苗分別在37℃、室溫(20℃)、2~8℃環(huán)境條件下放置10天、2個月、1年,間隔一段時間測定一次EID50,同時設(shè)置常規(guī)疫苗作為對照組。數(shù)據(jù)顯示,隨著時間的推移,疫苗病毒的效價會持續(xù)不斷降低。耐熱保護劑凍干疫苗在37℃條件下放置10d,其效價由10-4.32下降到10-3.38;在室溫中放置2個月,效
5、價由10-4.625降到10-3.620,常規(guī)疫苗則在1周后就從10-4.75降到10-3.52;耐熱保護劑凍干疫苗在2~8℃條件下放置12個月時,效價由10-4.36降到10-3.37,第6個月時檢測效價達到10-3.82,而常規(guī)疫苗在半年之后效價已經(jīng)從10-4.45降到10-3.44。
將耐熱保護劑凍干疫苗用于動物實驗,包括安全性檢驗、免疫效力檢驗及抗體水平監(jiān)測。將易感雞分為A(耐老化前的疫苗)、B(耐老化后的疫苗)、C(
6、PBS對照)三組,每組10只。安全性檢驗的免疫劑量為10羽份,三組的存活率均達到80%以上。免疫效力檢驗使用的攻毒株為M41株,攻毒劑量為1羽份,A、B兩組的保護率均達到80%以上,對照組只有1只雞存活。對發(fā)病雞與外表健康雞進行解剖,作氣管的病理切片,電鏡下可見發(fā)病雞的氣管纖毛脫落,細胞壞死,而外表健康雞則纖毛完整??贵w水平測試數(shù)據(jù)表明,A、B兩組抗體消長趨勢一致,且A組效果較好。兩組在21~28 d均達到抗體的最高水平。
綜
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