陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70載AT1受體反義寡核苷酸對自發(fā)性高血壓大鼠心室重構(gòu)的影響.pdf

1、目的：采用陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70作為運(yùn)載系統(tǒng)，以SHR為研究對象，探討MPC30-DEA70能否有效地負(fù)載針對自發(fā)性高血壓大鼠AT1受體基因的AS-ODN(AT1-RAS-ODN)及對SHR心室重構(gòu)及血壓的影響。
　　方法：1.應(yīng)用原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(atom transfer radicalpolymerization，ATRP)法合成具有高度生物相容性的MPC30-DEA70；2-轉(zhuǎn)染7天后取心肌組織做快速

2、冰凍切片，應(yīng)用熒光顯微鏡(FM)觀察MPC30-DEA70和MPC30-DEA70/FAM-AS-ODN在心肌內(nèi)的轉(zhuǎn)染情況；3.用SHR作為實驗動物模型，采用心肌內(nèi)直接注射的方式轉(zhuǎn)染MPC30-DEA70/AT1-R AS-ODN(按N/P比值20:2，30:2)4周，并設(shè)立WKY大鼠正常對照。通過如下方法評價復(fù)合物對大鼠心室重構(gòu)及血壓的影響：①采用無創(chuàng)尾套法測定治療前后大鼠的血壓；②測左心重/體重比重評價大鼠的心室肥厚程度；③HE染色

3、檢測左心室肌病理變化；天狼猩紅-苦味酸染色檢測左心室肌膠原沉積；④western blot法檢測MPC30-DEA70/AT1-RAS-ODN對SHR中AT1-R、p38MAPK蛋白表達(dá)的影響；RT-PCR檢測MPC30-DEA70/AT1-R AS-ODN對AT1-R mRNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1.FM下觀察可見MPC30-DEA70(FAM標(biāo)記)能夠安全、有效地轉(zhuǎn)入心臟組織，劑量大時呈現(xiàn)一定的毒性。2.袖套尾動脈測壓法發(fā)

4、現(xiàn)干預(yù)治療4周后，SHR組、N/P=30:0組、N/P=0:2組、N/P=20:2組、N/P=30:2組比較各組間SBP無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；組內(nèi)比較，隨著時間的延長，4W的血壓明顯高于同組內(nèi)0W的血壓(P<0.05)。3.MPC30-DEA70/AT1-RAS-ODN對SHR心室重構(gòu)的影響：SHR組大鼠有明顯的心室重構(gòu)現(xiàn)象。與正常組WKY相比，模型組大鼠HMI增高(P<0.05)；經(jīng)治療4周后，與SHR組比較，N/P=20:2

5、組、N/P=30:2治療組能降低大鼠心肌肥厚指標(biāo)(P<0.05)；4.病理觀察：與正常WKY組比較，SHR組心肌組織形態(tài)及心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損，光鏡下可見心肌細(xì)胞明顯濁腫，空泡樣變化；細(xì)胞核肥大或固縮；細(xì)胞內(nèi)容物成顆粒狀，斷裂融合，天狼星染色可見模型組SHR大鼠心肌膠原分柿較多，N/P=20:2組、N/P=30:2治療組能改善SHR組上述病理改變及心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。5.Westernbolt法檢測到應(yīng)用MPC30-DEA70轉(zhuǎn)染AT