陽離子磷酸膽堿聚合物載AT1受體的siRNA對血管內皮細胞AT1受體表達的影響.pdf

1、目的：觀察新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70能否有效地轉染針對AT1受體的小干擾RNA(AT1-R siRNA)至人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelialcells，HUVECs)及轉染后對血管內皮細胞AT1受體表達的影響，這可能為MPC30-DEA70作為基因載體在心血管疾病中的運用奠定基礎。
　　方法：1.應用瓊脂糖凝膠電泳表征具有不同比值的MPC30-DEA70(N)與s

2、iRNA(P)(N/P=0，1，3，5，10和15∶1)的復合物。2.將不同比例的MPC30-DEA70/AT1-R siRNA基因復合物轉染至人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)，應用倒置熒光顯微鏡(FM)檢測其細胞內的定位及分布，流式細胞儀(FCM)檢測轉染效率及熒光強度。3.最后以較佳配比復合物(N/P=1，3，5和10∶1)轉染血管內皮細胞，用Western blot法和RT-PCR法檢測AT1受體蛋白及mRNA的表達情況。

3、　　結果：1.不同N/P比值的PC復合物在電泳中可見不同程度的電泳遲滯現象，隨電性增強而顯著。2.倒置熒光顯微鏡觀察到MPC30-DEA70/siRNA復合物在細胞內的轉運，提示其有效的細胞內定位。流式細胞術顯示隨N/P比值的增大，轉染效率明顯增大，熒光強度也隨之增強，與對照組相比有顯著差異(P＜0.05)。3.Western blot法和RT-PCR法顯示PC基因復合物可使AT1受體的蛋白和mRNA表達的下降，且隨著N/P比值的增大，