骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)防治失神經(jīng)肌肉萎縮的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)將成年大鼠的骨髓細(xì)胞采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)進(jìn)行培養(yǎng)、傳代，并選取BMSCsCD44及CD45抗原表型來(lái)鑒定獲得干細(xì)胞，然后注入大鼠失神經(jīng)肌肉模型的神經(jīng)斷端，觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)失神經(jīng)支配骨骼肌萎縮的防治作用，并為臨床治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法:1.取SD大鼠1只，無(wú)菌條件下取股骨和脛骨的骨髓細(xì)胞,

2、將骨髓細(xì)胞用percoll分離液(比重1.077)分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞，然后將單細(xì)胞懸液接種于含15％小牛血清DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)、純化和擴(kuò)增。描畫出MSCs生長(zhǎng)曲線，通過(guò)免疫組化法檢測(cè)干細(xì)胞CD44、CD45表面標(biāo)志物。
　　2.選取健康SD大鼠36只，切斷左側(cè)后肢坐骨神經(jīng)制備神經(jīng)缺損模型，隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，觀察組肌肉注射1.5×105個(gè)/ml的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液0.2 ml，對(duì)照組注入同等劑量低糖DMEM

3、培養(yǎng)液，分別于2、4、6周后對(duì)2組大鼠進(jìn)行大體觀察、檢測(cè)肌濕重、肌纖維橫截面積、坐骨神經(jīng)指數(shù)(SFI)，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肌肉組織Bcl-2、Bax的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:利用密度梯度離心結(jié)合貼壁篩選法能有效分離純化BMSCs，培養(yǎng)出的細(xì)胞均具有典型的干細(xì)胞形態(tài)特征，傳代后細(xì)胞增殖速度較快。BMSCs標(biāo)志物CD44呈陽(yáng)性表達(dá)，造血干細(xì)胞標(biāo)志物CD45陰性表達(dá)。造模后2、4、6周，觀察組大鼠腓腸肌濕重、腓腸肌纖維橫截面積均顯著高于對(duì)

4、照組，SFI則顯著高于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。術(shù)后2、4、6周，觀察組肌肉組織中Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度均高于對(duì)照組，Bax陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度均低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:1.用密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法能有效分離出純度較高的BMSCs，并具有良好的增殖速度，體外培養(yǎng)的后的BMSCs可進(jìn)行體內(nèi)移植，并在局部損傷微環(huán)境中發(fā)揮作用。
　　2.BMSCs可提高失神經(jīng)后骨骼肌濕