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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
苯作為一種重要的工業(yè)化學(xué)物質(zhì),被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)和生活。過度暴露于苯所帶來的危害也日漸為人們所重視。苯對(duì)骨髓的造血系統(tǒng)的抑制可導(dǎo)致血三系的下降,甚至造成再生障礙性貧血、白血病等嚴(yán)重血液疾病。故而對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步深入的研究具有重要意義。本課題組前期體外研究證實(shí)苯及其代謝物處理后骨髓單個(gè)核細(xì)胞TOPOⅡα的水平發(fā)生改變。本研究旨在建立苯吸入小鼠模型,驗(yàn)證模型小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞TOPOⅡα基因表達(dá)(mRNA水平、蛋白表達(dá)量)
2、及酶活性的變化。探索應(yīng)用HDACi(TSA、MCP30)后對(duì)模型小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞TOPOⅡα水平改變的影響。
方法:
1.建立苯吸入小鼠模型:6-7周齡的CD1雄性小鼠隨機(jī)分為6組,分別為對(duì)照組、苯組、TSA組、苯+TSA組、MCP30組、苯+MCP30組。其中苯組、苯+TSA組、苯+MCP30組進(jìn)行為期2月的動(dòng)式苯吸入染毒,苯+TSA組、MCP30組、苯+MCP30組按時(shí)按規(guī)定給藥。
2.運(yùn)用Weste
3、rn Blot法檢測(cè)苯模型小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞TOPOⅡα蛋白表達(dá)的改變。
3.應(yīng)用TOPOⅡ檢測(cè)試劑盒,根據(jù)DNA超螺旋解旋法檢測(cè)各組小鼠骨髓單個(gè)核TOPOⅡ酶活性的變化。
4.運(yùn)用Real time PCR測(cè)定各組模型小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞TOPOⅡα mRNA水平的改變。
結(jié)果:
1.苯吸入小鼠模型建立, Western blot法檢測(cè)TOPOⅡα蛋白表達(dá)量
1)苯組較對(duì)照組明顯降低,差
4、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);苯+TSA組、苯+MCP30組較對(duì)照組降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2)苯+TSA組、苯+MCP30組較苯組蛋白表達(dá)量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。苯+TSA組與苯+MCP30組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。苯+TSA組較TSA組降低,苯+MCP30組較MCP組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3) TSA組與MCP30組較對(duì)照組,無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
2.DNA
5、超螺旋解旋法檢測(cè)苯吸入小鼠模型TOPOⅡ酶活性結(jié)果
1)苯組較對(duì)照組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);苯+TSA組、苯+MCP30組較對(duì)照組降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2)苯+TSA組、苯+MCP30組較苯組蛋白表達(dá)量升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。苯+TSA組與苯+MCP30組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。苯+TSA組較TSA組降低,苯+MCP30組較MCP組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。<
6、br> 3) TSA組與MCP30組較對(duì)照組,無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
3.RT-PCR法檢測(cè)TOPOⅡα mRNA水平的結(jié)果
1)苯組較對(duì)照組明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);苯+TSA組、苯+MCP30組較對(duì)照組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2)苯+TSA組、苯+MCP30組較苯組mRNA水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。苯+TSA組與苯+MCP30組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。苯+TSA組較
7、TSA組降低,苯+MCP30組較MCP組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3) TSA組與MCP30組較對(duì)照組,無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)論:
1.建立苯吸入小鼠模型,300ppm苯濃度吸入后,苯組模型小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞TOPOⅡα的mRNA水平和蛋白表達(dá)均下降,組蛋白TOPOⅡα酶活性受到抑制。
2.TSA、MCP30應(yīng)用于苯吸入模型小鼠中,能提高苯吸入后小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞組蛋白的低乙?;?/p>
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