利用畢赤酵母系統(tǒng)表達(dá)重組蛋白.pdf

1、畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是目前最為成功的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一。該系統(tǒng)操控簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)，表達(dá)量高，具有翻譯后修飾的能力，不存在原核表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)毒素難以去除的問(wèn)題，也不存在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的病毒和支原體污染問(wèn)題。目前已有多種外源蛋白在該系統(tǒng)中成功表達(dá)。我們利用該系統(tǒng)表達(dá)了幾種重組蛋白。 1.復(fù)合干擾素突變體根據(jù)畢赤酵母密碼子偏性合成了復(fù)合干擾素突變體基因，構(gòu)建了分泌型酵母表達(dá)載體，線性化后轉(zhuǎn)化GS115。在發(fā)酵罐中進(jìn)行了高密度發(fā)酵，表達(dá)量為

2、112mg/L，發(fā)酵上清經(jīng)超濾、三步層析純化獲得純度大于98％的重組蛋白，比活性大于6×108IU/mg。 2.人干擾素-β1a合成了人IFN-β1a基因，構(gòu)建了酵母表達(dá)載體，線性化后轉(zhuǎn)化GS115。甲醇誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化子，細(xì)胞病變抑制法測(cè)定誘導(dǎo)上清的抗病毒活性，培養(yǎng)上清中的表達(dá)量為2×105IU/mL。 3.組織型纖溶酶原激活劑衍生物rPAm構(gòu)建了rPAm的酵母表達(dá)載體，并在畢赤酵母分泌表達(dá)，培養(yǎng)上清中的表達(dá)量為1.6mg/L