利用畢赤酵母發(fā)酵表達(dá)植物甜蛋白(brazzein)的初步研究

1、北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文利用畢赤酵母發(fā)酵表達(dá)植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究姓名：趙紅玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化工指導(dǎo)教師：陳勁春20040529北京化工大學(xué)碩論文利用畢赤酵母發(fā)酵表達(dá)植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究中文摘要近年來(lái)從非洲植物中提取出了一些甜味蛋白，作為一種天然非糖類的甜味劑，其具有高甜味、低熱卡、無(wú)毒安全、多功能等優(yōu)點(diǎn)，不會(huì)導(dǎo)致齲齒和肥胖癥，糖尿病患者也可以食用。但是由于提取資源有限，利用基因工程的

2、方法生產(chǎn)甜味蛋白，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本文研究的植物甜蛋白(Brazzein)是甜味蛋白中分子量較小的一員，僅為64kD，由54個(gè)氨基酸殘基組成，它的相對(duì)甜度是蔗糖的2000倍，而且具有良好的熱穩(wěn)定性。已有人成功的利用大腸桿菌和轉(zhuǎn)基因植物實(shí)現(xiàn)了表達(dá)。畢赤酵母是一種可以以甲醇為唯一碳源的非常規(guī)酵母，具有強(qiáng)有力的AOX啟動(dòng)子，可將外源基因整合到宿主的染色體上，繼代十分穩(wěn)定，蛋白可以分泌表達(dá)，實(shí)現(xiàn)高密度發(fā)酵，因此畢赤酵母是一種高效蛋白表達(dá)體系

3、。本文采用巴斯德畢赤酵母(Pichiapastori)GSll5作為宿主菌進(jìn)行了表達(dá)植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究。將含有Brazzein基因的pPIC9K穿梭質(zhì)粒電導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母(Pichiapastori)GSll5中，并從22個(gè)HisMut5陽(yáng)性克隆中篩選出高拷貝轉(zhuǎn)化子2個(gè)，將其誘導(dǎo)分泌表達(dá)的產(chǎn)物進(jìn)行Tricine—SDSPAGE電泳鑒定，目標(biāo)蛋白分子量與理論值一致；對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，采用YPG作為種子液，確定了