2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩65頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、溶菌酶在自然界有廣泛的分布,全稱1,4-β-N-乙酰胞壁酸聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrolase),簡稱胞壁酸酶或胞壁質酶(muramidase)。溶菌酶作為一種先天非特異免疫防御因子,在機體對抗感染性病原菌中發(fā)揮重要作用。根據(jù)其物種來源以及結構、分子量的不同可分為以下六種類型:雞型溶菌酶(chicken type,c型);鵝型溶菌酶(geese type,g型);無脊椎動物溶菌酶(inverte

2、brate type,i型);植物溶菌酶;微生物溶菌酶;噬菌體溶菌酶(phage type,p型)。C型溶菌酶是分布最廣泛也是唯一同時在脊椎動物和無脊椎動物中存在的類型,因此人們對c型溶菌酶的研究也最為深入。
  LYC1(LYZL6)是本實驗室發(fā)現(xiàn)和克隆的一個新的人c型溶菌酶家族基因。對LYC1蛋白序列的分析表明,它與人溶菌酶氨基酸序列上的一致性達到44%,并具有c型溶菌酶保守的8個Cys殘基以及Glu-35和Asp-52催化殘

3、基。
  本研究通過建立和應用畢赤酵母表達系統(tǒng),依據(jù)畢赤酵母的密碼子偏好特性人工合成了去除自身信號肽的LYC1基因序列,并構建畢赤酵母α-因子信號肽引導表達具有天然N端LYC1的重組pPIC9k-LYC1分泌型畢赤酵母載體。將線性化重組質粒電轉入畢赤酵母菌株GS115和SMD1168中,使其定點整合進畢赤酵母基因組中。通過營養(yǎng)篩選以及多拷貝篩選,獲得穩(wěn)定整合表達載體的多拷貝插入菌株。通過搖瓶培養(yǎng)和誘導,篩選出表達能力強的重組菌株,

4、并優(yōu)化表達條件。進一步在30L發(fā)酵罐上進行發(fā)酵研究,通過控制發(fā)酵工藝如轉速、通氣量、甘油/甲醇流加方式、溫度、pH等參數(shù)以及添加補料,使蛋白表達量得到了提升,為接下來的純化工作提供了一定量的目標蛋白。
  SDS-PAGE顯示LYC1重組蛋白發(fā)酵上清呈現(xiàn)不均一性,可能是重組蛋白發(fā)生了降解、糖基化或聚集導致。對樣品的質譜分析證實了LYC1的表達。GS115重組菌株蛋白表達量較SMD1168為少,這可能因為GS115表達蛋白降解更為嚴

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論