消敏顆粒抗Ⅰ型超敏反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 研究消敏顆粒抗皮膚、全身Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用并探討其機(jī)制，為臨床應(yīng)用消敏顆粒治療蕁麻疹等Ⅰ型超敏反應(yīng)性疾病提供理論依據(jù)。 方法: 本實(shí)驗(yàn)分三部分進(jìn)行消敏顆粒抗Ⅰ型超敏反應(yīng)的研究。首先，進(jìn)行消敏顆粒抗皮膚Ⅰ型超敏反應(yīng)的研究，包括利用組胺、5-羥色胺所致小鼠毛細(xì)血管通透性增高實(shí)驗(yàn)和小鼠耳異種被動(dòng)皮膚超敏反應(yīng)(PCA)模型，研究消敏顆粒對(duì)組胺及5-羥色胺所致小鼠毛細(xì)血管通透性增高、PCA以及足跖腫脹的影響。其次，

2、進(jìn)行消敏顆?？谷恝裥统舴磻?yīng)的研究，包括利用Compound48/80致小鼠休克及抗原所致豚鼠過(guò)敏性休克模型，研究消敏顆粒對(duì)動(dòng)物過(guò)敏性休克的影響。最后，對(duì)消敏顆粒抗Ⅰ型超敏反應(yīng)的機(jī)制進(jìn)行探討，包括消敏顆粒對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響；熒光測(cè)定改良法檢測(cè)消敏顆粒對(duì)大鼠肥大細(xì)胞釋放組胺的影響；免疫組化法檢測(cè)消敏顆粒對(duì)大鼠肥大細(xì)胞釋放5-羥色胺的影響；ELISA法檢測(cè)消敏顆粒對(duì)致敏大鼠血清IgE含量的影響；ELISA法檢測(cè)消敏顆粒對(duì)致敏大

3、鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4的含量的影響；RT-PCR方法檢測(cè)消敏顆粒對(duì)致敏大鼠脾淋巴細(xì)胞的IFN-γmRNA、IL-4mRNA表達(dá)的影響；透射電鏡觀察消敏顆粒對(duì)脾組織T細(xì)胞、培養(yǎng)脾T細(xì)胞凋亡的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)消敏顆粒對(duì)血T細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果:1.消敏顆粒對(duì)組胺致小鼠毛細(xì)血管通透性增高的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒對(duì)組胺致小鼠毛細(xì)血管通透性增高有抑制作用，各劑量組與對(duì)照組比較均有顯著性差異(低劑量組P＜0.05，中、

4、高劑量組P＜0.01)，消敏顆粒低、中、高劑量組呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。 2.消敏顆粒對(duì)5-羥色胺致小鼠毛細(xì)血管通透性增高的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒對(duì)5-羥色胺致小鼠毛細(xì)血管通透性增高有抑制作用，各劑量組與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。 3.消敏顆粒對(duì)小鼠耳異種被動(dòng)皮膚超敏反應(yīng)(PCA)的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒各組PCA均明顯減輕，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。 4.消敏顆粒對(duì)組胺所致小鼠

5、足跖腫脹的影響：結(jié)果表明，低劑量組在注射后30min時(shí)有一定抑制作用(P＜0.05)，以后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，作用逐漸減弱。中劑量組和高劑量組在本實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)的各時(shí)間段均可顯著抑制足跖腫脹。 5.消敏顆粒對(duì)Compound48/80致小鼠休克的影響：結(jié)果表明，可導(dǎo)致小鼠休克、死亡，消敏顆粒可以降低其死亡率，高劑量組效果較明顯，與模型組比較，有顯著性差異(P=0.05)。 6.消敏顆粒對(duì)抗原所致豚鼠過(guò)敏性休克的影響：結(jié)果表明，消

6、敏顆粒各組均可延緩其發(fā)敏時(shí)間，與模型組比較，均有顯著性差異(P＜0.01)。 7.消敏顆粒對(duì)大鼠血清IgE生成的影響：結(jié)果表明，消敏顆?？梢种艻gE的分泌，各劑量組與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。 8.消敏顆粒對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響：結(jié)果表明，與正常組比較，各實(shí)驗(yàn)組肥大細(xì)胞脫顆粒均增多，差異顯著。消敏顆粒各組與模型組比較，均可減少肥大細(xì)胞脫顆粒，差異有顯著意義(P＜0.01)。 9.消敏顆粒對(duì)

7、大鼠腹腔肥大細(xì)胞釋放組胺的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒各組與模型組相比，大鼠腹腔肥大細(xì)胞組胺的釋放量均明顯降低(P＜0.01)，消敏顆粒高劑量組與撲爾敏組肥大細(xì)胞組胺的釋放量均低于低劑量組，差異有顯著意義(P＜0.01)。 10.消敏顆粒對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞釋放5-羥色胺的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒各組部分腹腔肥大細(xì)胞顆粒脫失，5-羥色胺表達(dá)減弱。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行綜合積分可見，消敏顆粒各組均明顯高于模型組，差異有顯著性意義(P＜0.01)。

8、 11.消敏顆粒對(duì)大鼠血清IFN-γ、IL-4含量的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒各組大鼠血清IFN-γ含量有增加的趨勢(shì)，其中以消敏顆粒高劑量組增加更明顯，與模型組比較，差異有顯著意義(P＜0.01)。消敏顆粒各組大鼠血清IL-4含量降低，其中以消敏顆粒高劑量組降低明顯，與模型組比較，差異有顯著意義(P＜0.01)。消敏顆粒組IFN-γ/IL-4高于模型組，差異有顯著意義(P＜0.01)。 12.消敏顆粒對(duì)大鼠脾IFN-γmRN

9、A、IL-4mRNA表達(dá)的影響：瓊脂糖電泳結(jié)果表明，消敏顆粒組和撲爾敏組IFN-γDNA經(jīng)擴(kuò)增后可見光亮的條帶，消敏顆粒高劑量組和撲爾敏組強(qiáng)于其它組。模型組IL-4DNA擴(kuò)增后其亮度強(qiáng)于正常組和各用藥組，正常組條帶最暗。相對(duì)表達(dá)量結(jié)果表明，消敏顆粒高劑量組大鼠脾組織IFN-γmRNA的表達(dá)增加明顯，與模型組比較差異有顯著意義(P＜0.01)。大鼠脾組織IL-4mRNA的表達(dá)模型組顯著高于正常組(P＜0.01)，消敏顆粒高劑量組表達(dá)顯著降

10、低(P＜0.01)。 13.透射電鏡觀察消敏顆粒對(duì)脾組織T細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果：結(jié)果表明，消敏顆粒組可見到脾T淋巴細(xì)胞早期凋亡表現(xiàn)和典型的凋亡小體。 14.透射電鏡觀察消敏顆粒對(duì)脾T細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果：結(jié)果表明，模型組的脾T淋巴細(xì)胞的結(jié)構(gòu)多趨于正常，發(fā)生明顯凋亡的細(xì)胞較少，偶見壞死脾T淋巴細(xì)胞。消敏顆粒組脾T淋巴細(xì)胞發(fā)生明顯的凋亡。 15.流式細(xì)胞儀檢測(cè)消敏顆粒對(duì)外周血T細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果：結(jié)果表明，消敏顆粒組T淋

11、巴細(xì)胞凋亡量明顯增加。消敏顆粒組與模型組比較，T淋巴細(xì)胞凋亡百分率差異有顯著性(P＜0.01)。 結(jié)論: 1.消敏顆粒具有抑制皮膚Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用：能抑制組胺及5-羥色胺致小鼠毛細(xì)血管通透性增高；能抑制小鼠異種皮膚被動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)；對(duì)組胺所致小鼠足跖腫脹具有抑制作用。 2.消敏顆粒具有抑制全身Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用：能降低Compound48/80所致小鼠過(guò)敏性休克的死亡率；可以延緩抗原所致豚鼠發(fā)敏時(shí)間，高劑量組可降低

12、死亡率。 3.消敏顆粒具有減少肥大細(xì)胞脫顆粒；減少組胺和5-羥色胺的釋放；降低血清總IgE含量：增加大鼠血清IFN-γ含量，降低IL-4含量，促進(jìn)IFN-γmRNA表達(dá)，抑制IL-4mRNA表達(dá)，使Th1/Th2比例上調(diào)；誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡等作用。 消敏顆粒不僅可以通過(guò)抑制IgE生成，減少肥大細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞釋放生物活性介質(zhì)拮抗Ⅰ型超敏反應(yīng)，而且可能通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2亞群之間的免疫平衡、誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡等作用機(jī)制發(fā)揮