腸道細菌通過調(diào)控結(jié)直腸癌不同亞群促進成瘤.pdf

1、【目的】研究腸道菌群在結(jié)直腸癌進展中的作用及其機制。
　　【方法】在華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院胃腸外科的結(jié)直腸癌確診患者選取尚未進行手術(shù)的病人，要求患者1個月內(nèi)飲食無太大變化，前一個月內(nèi)未服用抗生素和其他可能影響腸道微生物的藥物和食物，并用同樣的原則選取相應(yīng)的健康志愿者。用無菌采樣用品采樣，擴增細菌并提取細菌代謝產(chǎn)物，根據(jù)代謝產(chǎn)物來源分為結(jié)直腸癌組和健康志愿者組。用細菌代謝產(chǎn)物處理SW620、LoVo和HT-29細胞，采用

2、克隆形成實驗檢測腫瘤的增殖能力，用成球試驗檢測各個細胞系的自我更新能力。用流式分選的方法獲得CD133不同亞群的細胞，采用克隆形成實驗檢測腫瘤細胞CD133亞群的增殖能力，用成球試驗檢測CD133不同亞群的自我更新能力，將分選后的細胞注射到免疫缺陷的NOD/SCID小鼠皮下檢測其成瘤能力，并用細菌代謝產(chǎn)物處理各組觀察細菌代謝產(chǎn)物對細胞的增殖、干性和成瘤能力的影響。用焦磷酸測序檢測健康志愿者和結(jié)直腸癌患者糞便菌群的組成。同時進一步研究細菌

3、代謝產(chǎn)物在腫瘤發(fā)展導(dǎo)致的相關(guān)的基因的變化，探討其細胞、分子水平的機制。
　　【結(jié)果】結(jié)直腸癌組代謝產(chǎn)物處理后，SW620、LoVo、HT-29的細胞球體形成率、克隆形成率較健康志愿者組明顯升高；用流式細胞儀分選CD133high和CD133low結(jié)直腸癌細胞，流式細胞儀檢測分選后純度。結(jié)直腸癌病人糞便的代謝產(chǎn)物的加入SW620、LoVo、HT-29 CD133high細胞后，結(jié)直腸癌患者組與健康志愿者組成球率相比，細胞球體形成率有

4、升高的趨勢，但是在CD133low組其球體形成率均明顯升高，并且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；CD133high細胞克隆形成率結(jié)直腸癌組克隆形成率與健康志愿者組比增加，差異無統(tǒng)計學(xué)意義 CD133low的SW620、LoVo、HT-29細胞克隆形成率，結(jié)直腸癌組克隆形成率高于健康志愿者組，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異。體內(nèi)成瘤實驗結(jié)果顯示，SW620細胞成瘤率，在健康志愿者HC1組的為60％（6/10），結(jié)腸癌患者P5中為100%（10/10），F(xiàn)12空白

5、對照組為40%（4/10），P5vsF12差異有統(tǒng)計學(xué)意義。分選后LoVo CD133high各組間差異無顯著差別，CD133low各組HC1組，結(jié)腸癌患者P5組和空白對照組分別為5/10、8/10和10/10，HC1 vs. F12(P＜0.05)并且以健康志愿者組抑制成瘤能力最強。焦磷酸測序?qū)嶒灲Y(jié)果顯示結(jié)直腸癌病人糞便同健康人糞便標本比較在螺旋桿菌屬（Helicobacter）、脫硫弧菌屬（Desulfomicrobiu）、希瓦氏菌