肌苷對化學性缺氧損傷的少突膠質細胞保護作用的研究.pdf

1、肌苷是一種在體內廣泛存在的小分子物質，它對多個系統、多種細胞都存在較好的保護作用。近年來的有關肌苷對中樞神經系統的保護作用的研究提示，肌苷不僅能夠調節(jié)免疫細胞的作用、促進神經元軸突廣泛的生長，還對損傷后的神經細胞的有較好的保護作用，在體外化學性缺氧環(huán)境中肌苷可以保護ROC-1細胞、星形膠質細胞和神經元的活性，在體內肌苷治療腦缺血損傷大鼠能夠減少神經細胞的凋亡和死亡、抑制血小板的聚積、磷酸肌醇的降解和鈣離子的形成、減輕腦缺血損傷程度，減小

2、腦梗死的體積、抑制谷氨酸的突觸后效應、促進大鼠神經功能恢復。盡管如此，但是ROC-1是一種大鼠少突膠質細胞和C6膠質細胞融合而成的雜交瘤細胞，同時具有這兩種細胞的屬性，無法肯定肌苷對少突膠質細胞缺氧損傷后有保護作用；另外ROC-1是一種不死的瘤細胞，且沒有區(qū)分不同的分化階段，無法真正體現少突膠質細胞對病理損傷的敏感性；最后，雖然肌苷治療腦缺血模型大鼠能夠減少神經細胞的凋亡、促進神經功能的恢復，但肌苷對體內缺血缺氧環(huán)境下的少突膠質細胞的保

3、護作用仍然不清楚。因此，調查研究肌苷對缺氧環(huán)境下少突膠質細胞的保護作用有著極其重要的意義。
　　本研究分為三部分，第一部分調查研究在化學性缺氧環(huán)境中肌苷是否對分化后的少突膠質細胞有保護作用；第二部分調查研究肌苷在化學性缺氧環(huán)境中是否對具有增殖能力的少突膠質前體細胞有保護作用；第三部分調查研究肌苷治療脊髓挫傷模型7天后對大鼠運動功能恢復和臨近壞死區(qū)的少突膠質細胞存活的影響。
　　第一部分實驗通過免疫熒光染色等形態(tài)學觀察，同時結

4、TUNEL染色、MTT實驗和ATP檢測實驗來評估肌苷對不同分化階段少突膠質細胞在化學性缺氧損傷環(huán)境下細胞存活和活性的影響。
　　結果表明：采用相同濃度的魚藤酮損傷不同分化階段的少突膠質細胞24h所造成的損傷不相同。因而，要達到大致相似的損傷程度所使用的魚藤酮濃度也就不同，未成熟少突膠質細胞的損傷濃度為5μM魚藤酮，成熟少突膠質細胞的損傷濃度為20μM魚藤酮。在未成熟少突膠質細胞和成熟少突膠質細胞大致相似的損傷程度下采用肌苷預處理受

5、損傷的少突膠質細胞，結果肌苷能明顯減少未成熟少突膠質細胞的死亡和凋亡，并且肌苷呈劑量依賴性提高受損的未成熟少突膠質細胞的活性，但是肌苷只能減少成熟少突膠質細胞的死亡，不能減少成熟少突膠質細胞的凋亡，并且10mM肌苷能提高受損成熟少突膠質細胞的活性。肌苷促進分化后少突膠質細胞的存活、提高分化后少突膠質細胞的活性和肌苷減少魚藤酮介導細胞內產生的過亞硝酸鹽、提供ATP有一定的相關性。對未成熟和成熟少突膠質細胞的保護效果的差異可能與這兩個階段少

6、突膠質細胞上的腺苷受體的表達差異有關。
　　第二部分實驗通過免疫熒光染色等形態(tài)學觀察，同時結合MTT實驗來評估肌苷對少突膠質前體細胞在化學性缺氧損傷環(huán)境下細胞存活和活性的影響。
　　結果表明：20μM魚藤酮能夠明顯地誘導OPCs的死亡、細胞活性和細胞總數下降，阻止NG2抗原的表達，但并沒有誘導OPCs的凋亡，10mM肌苷預處理魚藤酮損傷的OPCs并不能夠減少魚藤酮所誘導的OPCs的死亡和活性下降，卻能提高受損細胞上NG2抗原

7、的表達。除此之外，值得注意的是10mM肌苷能夠顯著降低正常培養(yǎng)的OPCs（也就是空白對照組的OPCs）的活性。
　　第三部分實驗通過行為學和免疫組織化學來觀察大鼠腹腔注射肌苷對脊髓挫傷模型大鼠運動功能恢復和臨近壞死區(qū)的少突膠質細胞存活數目的影響。
　　結果表明：給脊髓挫傷大鼠模型腹腔注射肌苷（75mg/kg，每8h一次）治療對大鼠的運動功能和臨近壞死區(qū)的少突膠質細胞存活數目并沒有改善作用。
　　在體外實驗中我們確實觀察

8、到肌苷能明顯促進化學性缺氧損傷的未成熟和成熟少突膠質細胞的存活和活性的提高。對分化后的少突膠質細胞的保護機制和肌苷所提供的ATP、肌苷清除過亞硝酸鹽具有一定的相關性。對化學性缺氧損傷的少突膠質前體細胞的存活和活性的提高沒有改善作用。同時在用肌苷治療脊髓挫傷大鼠模型時也沒有觀察到損傷區(qū)周邊的少突膠質細胞的數目增加和大鼠運動功能恢復，可能的原因是：脊髓損傷后的給藥劑量、給藥途徑、給藥時間和觀察時間長度可能對肌苷治療脊髓損傷大鼠的療效的存在著