枸杞葉醇提物中對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞保護(hù)作用成分的研究.pdf

1、以枸杞葉為研究對(duì)象，把枸杞葉醇提物的得率和小膠質(zhì)細(xì)胞的存活率作為考察指標(biāo)，研究了枸杞葉醇提物中有效成分的提取工藝條件；對(duì)枸杞葉醇提物進(jìn)行系統(tǒng)分離，將得到的四個(gè)部位進(jìn)行化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試，并采用MTT法確定對(duì)氯化甲基汞(MMC)誘導(dǎo)損傷的小膠質(zhì)細(xì)胞具有保護(hù)作用的有效部位；接著利用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、制備液相等多種色譜分離技術(shù)對(duì)有效部位進(jìn)行分離純化，利用1H-NMR、13C-NMR現(xiàn)代技術(shù)對(duì)單體化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，并對(duì)單體化合物進(jìn)行活性

2、測(cè)試，確定活性成分。主要結(jié)果如下：
　　1.有效成分的最佳提取工藝條件的確定
　　以枸杞葉醇提物的得率和小膠質(zhì)細(xì)胞的存活率作為考察指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)考察乙醇濃度、回流時(shí)間、料液比、溫度對(duì)提取效果的影響，根據(jù)考察結(jié)果運(yùn)用正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝，最終確定有效成分的最佳提取條件為：70％乙醇，料液比為1：10，溫度80℃，回流時(shí)間2.5 h，提取2次，而且驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果證明最佳提取工藝穩(wěn)定，重復(fù)性好，合理可行。
　　2.有效成

3、分的提取及不同部位化學(xué)成分預(yù)試
　　稱取8500 g粉碎好的枸杞葉，用最佳提取條件進(jìn)行提取，得到枸杞葉醇提物浸膏2192 g。取2141g浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，最終得到石油醚部位浸膏84.27 g（3.94%）、乙酸乙酯部位浸膏74.60 g（3.48%）、正丁醇部位浸膏120.77 g（5.64%）和水部位浸膏1861.36 g（86.94%），說明枸杞葉醇提物中親水性的成分含量較高。
　　采用試管預(yù)試法

4、及濾紙片法對(duì)不同部位化學(xué)成分進(jìn)行預(yù)試，結(jié)果表明，石油醚部位明顯含有油脂類化合物；乙酸乙酯部位明顯含有黃酮及苷類、甾體、萜類成分、酚性成分和有機(jī)酸；正丁醇部位明顯含有黃酮及苷類、生物堿和酚性成分；水部位明顯含還原糖、多糖和苷類、氨基酸。
　　3．有效部位的確定
　　采用MTT法對(duì)枸杞葉醇提物的四個(gè)不同部位進(jìn)行活性測(cè)試，結(jié)果表明枸杞葉醇提物的有效部位主要是乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
　　4.有效部位化學(xué)成分的分離及結(jié)構(gòu)鑒定

5、
　　采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、制備液相等多種色譜分離技術(shù)對(duì)枸杞葉醇提物乙酸乙酯部位和正丁醇部位進(jìn)行分離純化，分離得到14個(gè)化合物，通過1H-NMR、13C-NMR現(xiàn)代技術(shù)對(duì)單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，確定出其中10個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，分別為對(duì)甲氧基苯甲酸（化合物3）、對(duì)甲氧基肉桂酸（化合物5）、東莨菪素（化合物6）、對(duì)羥基苯甲醛（化合物7）、對(duì)羥基苯乙酮（化合物8）、(Z)-2-亞乙基-3-甲基丁二酸（化合物9）、槲皮素（化合物10）

6、、腺苷（化合物11）、東莨菪苷（化合物13）、蘆?。ɑ衔?4）。其中化合物3、5、7、9、11首次從枸杞屬植物中分離得到，化合物6、8、13首次從枸杞葉中分離得到。
　　5.活性成分的確定
　　采用MTT和Griess法對(duì)單體化合物進(jìn)行活性研究，確定活性成分為槲皮素和蘆丁。
　　枸杞葉醇提物中的槲皮素和蘆丁可以提高M(jìn)MC誘導(dǎo)損傷的小膠質(zhì)細(xì)胞的存活率，抑制炎癥因子NO的釋放，為尋找預(yù)防或治療阿爾茨海默病的藥物提供了實(shí)驗(yàn)