重癥急性胰腺炎中腸上皮自噬對腸道細(xì)菌移位的影響及其可能機(jī)制.pdf

1、目的：在重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）中，腸源性感染是SAP患者后期感染的重要預(yù)后指標(biāo)，細(xì)菌移位（bacterial translocation，BT）是腸源性感染的重要原因，在 SAP早期便可引起全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），進(jìn)而導(dǎo)致多器官功能衰竭（multiple organ dysfunction syn

2、drome，MODS）與膿毒血癥，是SAP后期死亡的主要因素，而SAP腸粘膜屏障損傷發(fā)生 BT的具體分子機(jī)制尚不明確。自噬參與多種疾病的病理生理過程，腸上皮自噬對于腸道穩(wěn)態(tài)及腸道免疫發(fā)揮重要作用，有研究證實(shí)腸上皮自噬具有清除侵入機(jī)體腸道細(xì)菌的作用，并且近期體外研究表明，自噬增強(qiáng)腸上皮緊密連接（tight junction，TJ）蛋白的表達(dá)。但是腸上皮自噬對于SAP患者腸道BT影響尚不明確，我們旨在研究SAP中腸上皮自噬對于腸道BT與腸上

3、皮TJ表達(dá)的影響。
　　方法：根據(jù)2012年修訂的亞特蘭大急性胰腺炎分類定義標(biāo)準(zhǔn)，并給予急性胰腺炎患者急性生理與慢性健康評分（APACHE-Ⅱ）評分，選取發(fā)病24小時(shí)內(nèi)入院APACHE-Ⅱ評分在8到12分之間的31位SAP患者。根據(jù)SAP患者外周血中，基于16S rDNA測序結(jié)果，確定患者外周血中細(xì)菌DNA的有無，將SAP患者分為細(xì)菌移位陽性組與細(xì)菌移位陰性組即BT（+）和BT（-），另選取健康的8人作為健康對照組（healthy

4、 control，HC），同時(shí)使用結(jié)腸鏡獲取SAP患者與健康對照組的結(jié)腸上皮粘膜組織；采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血清內(nèi)毒素水平；采用免疫印跡技術(shù)（Western blot）檢測腸上皮組織的緊密連接蛋白Zonula occluden-1（ZO-1）、claudins-2（CL-2）、occludin（OC）以及自噬標(biāo)志蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3Ⅱ（LC3Ⅱ）的表達(dá)水平。結(jié)果：在納入的31位SAP患者中，有14位患者外周血樣本可檢測

5、到細(xì)菌DNA，陽性率為45.2%，BT（+）有14人和BT（-）有17人。經(jīng)方差分析結(jié)果顯示，血清內(nèi)毒素在三組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.981，P＜0.05），利用LSD-t檢驗(yàn)比較結(jié)果顯示，在SAP患者中BT（+）組中檢測到血清內(nèi)毒素水平顯著高于BT（-）組和HC組（t=4.973，P＜0.05，t=8.661，P＜0.05）；CL-2蛋白表達(dá)在三組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.641，P＜0.05），利用 LSD-t進(jìn)行組間比

6、較結(jié)果顯示，在 BT（+）組患者中CL-2蛋白表達(dá)水平高于BT（-）組和HC組（t=6.875，P＜0.05，t=10.733，P＜0.05）；BT（+）組患者的TJ蛋白ZO-1和OC均低于BT（-）組患者。此外，自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ表達(dá)在三組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.574，P＜0.05），BT（-）患者腸上皮LC3Ⅱ表達(dá)高于BT（+）患者（t=4.765,P＜0.05，t=6.981,P＜0.05），且在SAP患者中CL-2