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文檔簡介
1、目的:以成年健康新西蘭大白兔建立面神經(jīng)上頰支橫斷損傷模型,探討再生室內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用牙髓干細胞和TGF-β3修復(fù)兔面神經(jīng)橫斷性損傷的可行性,比較相同濃度不同時間段面神經(jīng)的恢復(fù)情況,為面神經(jīng)損傷的臨床治療提供可靠依據(jù)。
方法:選用清潔級健康成年新西蘭大白兔48只,隨機分為實驗組、對照1、對照2、空白組,每組12只,實驗組和對照組建立面神經(jīng)上頰支橫斷傷模型,離斷的神經(jīng)兩斷端用硅膠管再生室橋接,試驗組:再生室內(nèi)注入100ng/μl TGF
2、-β3液10μl和1×108/LDPSCs懸液0.1ml;對照1:加入同樣量的TGF-β3液;對照2:加同樣量的PBS液;空白組不作任何處理.術(shù)后肌注青霉素鈉三日,每天觀察觸須拂動恢復(fù)情況。分別與術(shù)后1周,4周,12周處死動物制備面神經(jīng)標本,進行大體觀察、透射電鏡觀測、組織學(xué)觀測及圖像分析來評價神經(jīng)再生恢復(fù)情況。
結(jié)果:48只模型全部進入結(jié)果分析,1)大體形態(tài)觀察,與對照組相比較,實驗組再生神經(jīng)恢復(fù)良好,其外膜血管豐富,神經(jīng)直
3、徑與近遠端相當,再生神經(jīng)韌性好;2)HE染色:實驗組新生的神經(jīng)纖維較多,神經(jīng)束大小不均,束間血管多,神經(jīng)纖維髓鞘化程度高,且厚度增大,軸突直徑也有所增大;對照組1瘢痕組織較多,新生纖維較實驗組少,已有少量髓鞘化,新生纖維排列不齊,有扭曲;對照組2可見少量新生纖維及脂肪細胞浸潤,新生纖維軸突分布不均且數(shù)量少,神經(jīng)纖維不連續(xù),盤旋扭曲,瘢痕組織較多。3)電鏡觀察見實驗組的再生纖維形態(tài)規(guī)則、髓鞘板層結(jié)構(gòu)清晰且多為有髓纖維,軸漿內(nèi)含有豐富的細胞
4、器;對照組1神經(jīng)纖維形態(tài)較規(guī)則但髓鞘發(fā)育欠佳,軸漿內(nèi)也含有相當數(shù)量的細胞器;對照組2可見變性的神經(jīng)纖維,有髓神經(jīng)纖維形態(tài)不規(guī)則,髓鞘發(fā)育不良結(jié)構(gòu)紊亂;4)圖像分析:實驗組再生神經(jīng)纖維總數(shù)多于兩個對照組,對照組1多于對照組2,差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05);實驗組再生神經(jīng)纖維直徑大于其它兩個各對照組,差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),對照組1與對照組2比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);12周組與4周組的神經(jīng)纖維總數(shù)和纖維直徑比較中,
5、12周組均優(yōu)于4周組,差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。5)免疫組化結(jié)果顯示實驗組和對照組中均出現(xiàn)GFAP陽性細胞,實驗組最多,對照組1其次,對照組2最少,差異隨恢復(fù)時間延長差異逐漸減?。籗100蛋白在胞漿呈強陽性表達,髓鞘弱陽性表達,術(shù)后12周,實驗組再生神經(jīng)染色陽性表達率高,神經(jīng)纖維排列整齊形態(tài)規(guī)則,對照組陽性表達率低,纖維扭曲明顯。
結(jié)論:(1)TGF-β3與牙髓干細胞聯(lián)合應(yīng)用可有效促進面神經(jīng)再生,二者聯(lián)合應(yīng)用比單獨應(yīng)
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