面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)術(shù)在面神經(jīng)損傷后修復(fù)中的作用及機(jī)制的研究.pdf

1、面神經(jīng)由于解剖位置的特殊性，易被外傷、炎癥、手術(shù)等導(dǎo)致?lián)p害。面神經(jīng)損傷常伴有比較嚴(yán)重的功能失用，包括眼瞼下垂、溢淚、角膜暴露以及鼻外觀改變、口腔閉合不全、笑容口角歪斜等，這對(duì)病人的生活及心理等造成了嚴(yán)重打擊。因此，對(duì)于病人以及醫(yī)生而言，面神經(jīng)損傷后的功能改善尤為重要。盡管，許多保守治療方案已在面神經(jīng)損傷后得到應(yīng)用以改善面神經(jīng)的功能，例如神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、電刺激、干細(xì)胞療法等，但是由于面神經(jīng)損傷后缺少自發(fā)的神經(jīng)再生功能，導(dǎo)致上述治療策略很難有

2、效的恢復(fù)面神經(jīng)損傷。因此，神經(jīng)斷端的端端吻合或者神經(jīng)移植成為面神經(jīng)斷傷后的主要治療方法。
　　神經(jīng)移植的原理為將機(jī)體其他部位的神經(jīng)移植至神經(jīng)損傷處，在面神經(jīng)修復(fù)中已得到較廣泛的應(yīng)用。近二十年來，副神經(jīng)、舌神經(jīng)、腓腸神經(jīng)、耳大神經(jīng)等都被用于面神經(jīng)斷傷后的修復(fù)。但是，由于顳骨解剖的復(fù)雜性，當(dāng)面神經(jīng)損傷情況較為復(fù)雜嚴(yán)重時(shí)，導(dǎo)致暴露面神經(jīng)近心端困難，且大部分患者的身體狀態(tài)均難以承受長(zhǎng)時(shí)間的復(fù)雜手術(shù)，導(dǎo)致神經(jīng)端端吻合術(shù)或者神經(jīng)移植術(shù)難以成行

3、。而面神經(jīng)離斷傷后如不及時(shí)處理，常導(dǎo)致其支配區(qū)域肌肉的萎縮及纖維化。此時(shí)，面神經(jīng)寄養(yǎng)術(shù)成為維持一定面部肌肉張力、延緩面部肌肉萎縮的一種新選擇。同其他神經(jīng)相比，由于耳大神經(jīng)解剖位置毗鄰面神經(jīng)，面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)術(shù)可以在較小的手術(shù)區(qū)域進(jìn)行，手術(shù)對(duì)患者的影響較小，也降低了手術(shù)難度。同時(shí)，由于面神經(jīng)橫切面的面積與耳大神經(jīng)橫切面的面積相似，也保證了面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)縫合術(shù)的手術(shù)縫合效果要優(yōu)于其他移植神經(jīng)?；谝陨蟽?yōu)點(diǎn)，面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)術(shù)在

4、臨床工作中愈受重視。
　　然而，目前仍未有關(guān)于在面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)術(shù)中神經(jīng)再生、功能恢復(fù)相關(guān)機(jī)制的研究，亦未有研究報(bào)道其作用機(jī)制是否與乙酰膽堿酯酶受體(AChR)以及神經(jīng)肌肉連接(neuromuscular junction，NMJ)相關(guān)。盡管在新近的報(bào)導(dǎo)中已經(jīng)證實(shí)，在NMJ的突觸后膜維持高濃度AChR是突觸有效傳遞的基本條件。
　　在本文研究中，首次建立了面神經(jīng)損傷的大鼠模型、面神經(jīng)端端吻合大鼠模型和面神經(jīng)-耳大神經(jīng)移植

5、寄養(yǎng)大鼠模型。并觀察了不同模型大鼠的面神經(jīng)功能恢復(fù)情況，進(jìn)而分別通過電生理實(shí)驗(yàn)和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)肌肉動(dòng)作電位及AChR表達(dá)變化，深入探討了耳大神經(jīng)在面神經(jīng)損傷修復(fù)過程的作用及機(jī)制。
　　目的：
　　1.成功建立面神經(jīng)損傷動(dòng)物模型、面神經(jīng)端端吻合動(dòng)物模型及面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)動(dòng)物模型;
　　2.評(píng)估面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)模型的面神經(jīng)功能恢復(fù)情況;
　　3.進(jìn)一步探討面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)術(shù)在面神經(jīng)損傷后修復(fù)中的作用機(jī)制

6、。
　　方法：
　　1.動(dòng)物模型建立:耳顯微鏡下解剖Wistar大鼠左側(cè)面神經(jīng)，僅僅暴露面神經(jīng)不做處理，建立對(duì)照組（Ctrl組）;直接切斷面神經(jīng)后對(duì)位縫合建立面神經(jīng)損傷模型（FC組）;面神經(jīng)斷端的端端吻合建立面神經(jīng)損傷后端端吻合模型(FF組);解剖耳大神經(jīng)，行面神經(jīng)斷端-耳大神經(jīng)吻合術(shù)，建立面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)動(dòng)物模型（FG組）。
　　2.面神經(jīng)功能檢測(cè):術(shù)后第8周及術(shù)后第12周分別檢測(cè)各模型組大鼠瞬目實(shí)驗(yàn)、觸須實(shí)驗(yàn)、

7、鼻尖偏向結(jié)果，評(píng)定面神經(jīng)功能。
　　3.探討機(jī)制:術(shù)后第8周及術(shù)后第12周重復(fù)解剖上述各模型組大鼠，觀察各組神經(jīng)吻合處生長(zhǎng)情況，利用電生理實(shí)驗(yàn)檢測(cè)神經(jīng)肌肉縫合處遠(yuǎn)端的面神經(jīng)傳導(dǎo)情況;大鼠行心臟灌注后取口輪匝肌神經(jīng)肌肉連接(NMJ)，迅速制備冰凍組織切片，利用免疫熒光技術(shù)進(jìn)行AChR染色，利用激光共聚焦顯微鏡觀察各模型組AChR表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.Wistar大鼠術(shù)后生長(zhǎng)良好，無意外死亡;面神經(jīng)損傷動(dòng)物模型、

8、面神經(jīng)端端吻合動(dòng)物模型及面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)動(dòng)物模型建立;術(shù)后8周及12周再次解剖發(fā)現(xiàn)面神經(jīng)損傷模型組面神經(jīng)斷端吻合處膨大，面神經(jīng)-耳大神經(jīng)寄養(yǎng)移植動(dòng)物模型組神經(jīng)吻合處亦有膨大，所有神經(jīng)吻合對(duì)位均良好。
　　2.行為學(xué)觀察:在瞬目實(shí)驗(yàn)中，同F(xiàn)F組相比，F(xiàn)G組在術(shù)后第8周及術(shù)后第12周評(píng)分均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而FG組同F(xiàn)C組相比，得分差異表現(xiàn)不明顯。而FF組第12周較第8周比較，得分降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ctrl組第

9、8周及第12周評(píng)分無明顯差異，且明顯低于其他三組，而FC組明顯高于其他各組。在觸須試驗(yàn)中，F(xiàn)G組在術(shù)后第8周及術(shù)后第12周評(píng)分均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而FG組同F(xiàn)C組相比，得分差異表現(xiàn)不明顯。而FF組第12周較第8周比較，得分降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ctrl組第8周及第12周評(píng)分無明顯差異，且明顯低于其他三組，而FC組明顯高于其他各組。在鼻尖偏向試驗(yàn)中，F(xiàn)G組及FF組12周得分較第8周降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ctrl組得分最

10、低，且第12周與第8周無明顯差異，F(xiàn)C組得分最高，且第8周與第12周無明顯差異。
　　3.電生理檢測(cè)結(jié)果顯示:術(shù)后第8周，F(xiàn)F組及FG組電生理潛伏期結(jié)果分別為:2.413±0.479 ms及3.298±0.383 ms，同Ctrl組相比(1.534±0.319 ms)，明顯下降（差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。各組電生理振幅結(jié)果分別為:FF組0.903±0.264 mV，F(xiàn)G組0.489±0.044 mV，Ctrl組1.829±0.054

11、mV。在12周，各組電生理潛伏期分別為:FF組1.827±0.335 ms; FG組3.373±0.308 ms，Ctrl組1.078±0.109 ms。各組相對(duì)應(yīng)振幅分別為:1.525±0.138 mV，0.758±0.146 mV，1.889±0.102 mV。由結(jié)果可見，F(xiàn)F組神經(jīng)傳導(dǎo)情況于術(shù)后第12周較術(shù)后第8周改善明顯.FG組術(shù)后第12周神經(jīng)傳導(dǎo)反應(yīng)較第8周亦有明顯好轉(zhuǎn)，但總體弱于同一時(shí)間FF組。FC組術(shù)后第8周及第12周均未

12、引出任何神經(jīng)電反應(yīng)。
　　4.AChR免疫熒光顯色結(jié)果:術(shù)后第8周，Ctrl組AChR顯色熒光連續(xù)、完整、亮度較高。而FF組AChR顯色熒光連續(xù)、完整、亮度均弱于Ctrl組，但均強(qiáng)于FG組，而FC組僅可以探測(cè)到微弱熒光顯色。術(shù)后第12周，F(xiàn)F組及Ctrl組AChRs顯色表達(dá)情況與第8周無明顯差別，F(xiàn)G組表達(dá)情況較第8周改善明顯，但仍弱于同一時(shí)間FF組及FG組熒光表達(dá)情況。FC組術(shù)后第12周熒光顯色較第8周無明顯變化，僅可探及微弱熒